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各種常見的血清不同點(diǎn)比較2023/12/11
血清是血漿凝固后分離出來(lái)的液體。當(dāng)血漿在離心過程中凝固后,血漿中的凝血因子會(huì)被消耗掉,形成透明液體的血清。因此,血清中不含凝血因子,但含有血漿中其他的成分,如蛋白質(zhì)、電解質(zhì)、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)等。常見的血清有胎牛血清、新生牛血清與小牛血清等,下面分它們的不同點(diǎn):1.血清類別牛血清類別胎齡胎牛血清(FBS)胎兒(母牛懷孕3-8個(gè)月)新生牛血清(NCS)出生10日內(nèi)小牛血清(BCS)16-22周供體血清成年牛2.采血方式不同胎牛血清:母牛懷孕3-8個(gè)月時(shí),采用剖腹心臟密閉穿刺取血新生牛血清、小牛血清、供體牛血
各種常見種類PCR概述介紹2023/12/04
PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PolymeraseChainReaction)的簡(jiǎn)稱,是一種體外擴(kuò)增特定DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)。PCR的常見種類分述如下:1、普通PCR普通PCR即一代PCR,使用普通PCR擴(kuò)增儀擴(kuò)增靶基因,并通過瓊脂糖凝膠電泳對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行定性分析。2、實(shí)時(shí)熒光定量PCR(QuantitativeReal-timePCR,qPCR)實(shí)時(shí)熒光定量PCR,也叫Real-TimePCR,即二代PCR,是指在PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系中加入熒光染料或者熒光基團(tuán),在整個(gè)PCR過程中通過收集熒光信號(hào)實(shí)時(shí)
抗體的科學(xué)保存條件分享2023/11/28
抗體的科學(xué)保存條件:1、抗體濃度抗體濃度過低(2、多克隆抗體多克隆抗體在血清中于-20℃保存十年其活性損失不大。然而,一旦抗體被純化后,儲(chǔ)存在50%的甘油中于-20℃保存,即使沒有凍融,其活性的損失也可以觀察到,盡管其進(jìn)程仍然非常緩慢。即使沒有甘油,只要你不經(jīng)常凍融,抗體也可以存儲(chǔ)在-20℃幾年甚至幾十年。另一個(gè)重要的事情是,該抗體濃度應(yīng)高于1毫克/毫升,因?yàn)橄〉目贵w容易失去活性而且容易造成物理吸附導(dǎo)致的損失。3、單克隆抗體單克隆抗體可以保存在50%的甘油存放于-20℃。也可以將其保存在飽和硫酸
ELISA實(shí)驗(yàn)檢測(cè)方法的優(yōu)缺點(diǎn)2023/11/20
ELISA實(shí)驗(yàn)檢測(cè)方法的優(yōu)缺點(diǎn):1、直接法(directELISA)將抗原直接固定在固相載體上,參加酶符號(hào)的一級(jí)抗體,即可測(cè)定抗原總量,此一級(jí)抗體的特異性非常重要。優(yōu)勢(shì):操作手續(xù)簡(jiǎn)略,因無(wú)須運(yùn)用二抗可防止交互反響。缺陷:實(shí)驗(yàn)中的一抗都得用酶符號(hào),但不是每種抗體都適合做符號(hào),費(fèi)用相對(duì)進(jìn)步。2.間接法(indirectELISA)此測(cè)定辦法與直接法相似,不一樣在于一級(jí)抗體沒有酶符號(hào),改用酶符號(hào)的二級(jí)抗體去辨識(shí)一級(jí)抗體來(lái)測(cè)定抗原量。優(yōu)勢(shì):二抗能夠加強(qiáng)信號(hào),并且有多種挑選能做不一樣的測(cè)定剖析。不加酶符號(hào)
傳代培養(yǎng)操作步驟及注意事項(xiàng)2023/11/13
原代細(xì)胞培養(yǎng)成功以后,需要進(jìn)行分離培養(yǎng),否則細(xì)胞會(huì)因生存空間不足或密度過大,營(yíng)養(yǎng)障礙,影響細(xì)胞生長(zhǎng)。細(xì)胞由原培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)分離稀釋后傳到新的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)的過程稱之為傳代培養(yǎng)。傳代細(xì)胞允許培養(yǎng)的細(xì)胞擴(kuò)增(形成細(xì)胞株),可以進(jìn)行細(xì)胞克隆,易于保存,但可能喪失一些特殊的細(xì)胞和分化特征。傳代細(xì)胞形成細(xì)胞株的最大利處在于提供了大量持久的實(shí)驗(yàn)材料,便于實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞株也是可以購(gòu)買的。1、操作步驟:(1)、吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液。(2)、向瓶?jī)?nèi)加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量。以能覆蓋培養(yǎng)瓶底為宜。(3)、置37
微生物培養(yǎng)基的操作步驟與注意事項(xiàng)2023/11/06
培養(yǎng)基(culturemedium)是人工配制的,適合微生物生長(zhǎng)、分離鑒別的營(yíng)養(yǎng)基礎(chǔ)。一般基礎(chǔ)培養(yǎng)基中古有蛋白胨、牛肉浸粉、酵母浸粉、氯化鈉、瓊脂等基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。微生物培養(yǎng)基應(yīng)用范圍很廣。例如,無(wú)菌試驗(yàn)培養(yǎng)基可檢查藥品、生物制品是否污染細(xì)菌,它直接關(guān)系到人民用藥安全;在臨床及食品衛(wèi)生檢驗(yàn)中常用選擇、鑒別培養(yǎng)基,此類培養(yǎng)基中根據(jù)用途不同,需要加入抑菌劑、指示劑、血液、糖等試劑,以利于特定細(xì)菌的分離與鑒別,需要使細(xì)菌大量生長(zhǎng)、繁殖的各類培養(yǎng)基;病毒培養(yǎng)及疫苗中則需用組織細(xì)胞培養(yǎng)液,主要成分為多種氨基
ELISA實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)“花板”結(jié)果原因與解決辦法2023/10/30
酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(EnzymeLinkedImmunoSorbentAssay,ELISA)原理是抗原或抗體的固相化及抗原抗體的酶標(biāo)記。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),由此進(jìn)行定性或定量分析。該實(shí)驗(yàn)因其靈敏度較高,特異性較好,操作較簡(jiǎn)單,可大批量操作而廣泛應(yīng)用于多種傳染性疾病的篩查工作中。然而,“花板”現(xiàn)象的出現(xiàn),往往會(huì)給實(shí)驗(yàn)者判讀結(jié)果帶來(lái)麻煩。所謂“花板”,就是空白、陰性、陽(yáng)性對(duì)照及室內(nèi)質(zhì)控孔結(jié)果正常,而標(biāo)本孔的OD值卻偏高,弱陽(yáng)性結(jié)果較多。
針對(duì)?PCR擴(kuò)增無(wú)目的條帶現(xiàn)象分析2023/10/23
聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)是在體外進(jìn)行的由引物介導(dǎo)的酶促DNA擴(kuò)增反應(yīng)。PCR反應(yīng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié):①模板核酸的制備;②引物的質(zhì)量與特異性;③酶的質(zhì)量;④PCR條件。尋找原因亦應(yīng)針對(duì)上述環(huán)節(jié)進(jìn)行分析檢測(cè)。1、模板a.模板質(zhì)量不佳,含有雜蛋白質(zhì),特別是染色體中的組蛋白;模板核酸變性不夠;提取制備模板時(shí)丟失過多,或吸入酚。建議選擇質(zhì)量可靠的提取試劑,重新提取高純度基因組模板;若模板為cDNA,需要檢查逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)及其所用RNA的純度及完整度。b.模板中含有尿嘧啶抑制高保真酶的活性,或含有Taq酶抑制劑。c.
有關(guān)RT-PCR詳細(xì)闡述2023/10/16
RT-PCR是指將逆轉(zhuǎn)錄(ReverseTranscription;RT)反應(yīng)和PCR(PolymeraseChainReaction)反應(yīng)組合在一起的方法。1、RT-PCR的原理RT-PCR將以RNA為模板的cDNA合成同PCR結(jié)合在一起,提供了一種分析基因表達(dá)的快速靈敏的方法。RT-PCR用于對(duì)表達(dá)信息進(jìn)行檢測(cè)或定量。另外,這項(xiàng)技術(shù)還可以用來(lái)檢測(cè)基因表達(dá)差異或不必構(gòu)建cDNA文庫(kù)克隆cDNA。RT-PCR比其他包括Northern印跡、RNase保護(hù)分析、原位雜交及S1核酸酶分析在內(nèi)的RNA
抗原抗體反應(yīng)的主要四特性解析2023/10/08
抗原抗體反應(yīng)是指抗原與相應(yīng)抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)。這種反應(yīng)既可在機(jī)體內(nèi)進(jìn)行,也可以在機(jī)體外進(jìn)行。抗原抗體反應(yīng)的過程是經(jīng)過一系列的化學(xué)和物理變化,包括抗原抗體特異性結(jié)合和非特異性促凝聚兩個(gè)階段,以及由親水膠體轉(zhuǎn)為疏水膠體的變化。抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)主要有四性:即特異性、比例性、可逆性,階段性。一、特異性抗原表位與抗體超變區(qū)結(jié)合的特異性,是兩者在化學(xué)結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)型上呈互補(bǔ)關(guān)系所決定的。這一特性,是應(yīng)用于臨床診斷的基礎(chǔ)。但某些天然抗原具有多種抗原表位,與另一物質(zhì)可能有共同抗原表位,對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生
常用的熒光素特性2023/10/03
熒光素發(fā)光原理:熒光實(shí)際上是一種發(fā)光類型,其中光子最初被吸收,導(dǎo)致原子處于激發(fā)狀態(tài)單線態(tài)。當(dāng)電子回落到基態(tài)時(shí),會(huì)發(fā)射出較低能量的光子。常用的熒光素特性:1、異硫氰酸熒光素(fluoresceinisothiocyanate,F(xiàn)ITC)為黃色或橙黃色結(jié)晶粉,吸收光490~495nm,發(fā)射光520~530nm,明亮的黃綠色熒光。2、四乙基羅丹明(rhodamine,RIB200)為橘紅色粉末,吸收光570nm,發(fā)射光595~600nm,橘紅色熒光。3、四甲基異硫氰酸羅丹明(tetramethylrh
有關(guān)抗體和重組蛋白重點(diǎn)解讀2023/09/21
重組蛋白(recombinantprotein)是指應(yīng)用重組DNA或重組RNA技術(shù)而獲得的蛋白質(zhì)。重組蛋白工程先應(yīng)用基因克隆或化學(xué)合成技術(shù)獲得目的基因(geneofinterest,GOI),連接到適合的表達(dá)載體,導(dǎo)入到特定的宿主細(xì)胞,利用宿主細(xì)胞的遺傳系統(tǒng),表達(dá)出有功能的蛋白質(zhì)分子。抗體的本質(zhì)是免疫球蛋白(immunoglobulins),指具有抗體(Ab)活性或化學(xué)結(jié)構(gòu),與抗體分子相似的球蛋白。無(wú)論是保存還是運(yùn)輸,請(qǐng)避免反復(fù)凍融。反復(fù)凍融,冰晶會(huì)破壞抗體和重組蛋白的空間結(jié)構(gòu),導(dǎo)致蛋白變性形成
細(xì)胞培養(yǎng)的一般過程科普2023/09/11
細(xì)胞培養(yǎng)(cellculture)是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境(無(wú)菌、適宜溫度、酸堿度和一定營(yíng)養(yǎng)條件等),使之生存、生長(zhǎng)、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種方法。細(xì)胞培養(yǎng)也叫細(xì)胞克隆技術(shù),在生物學(xué)中的正規(guī)名詞為細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。細(xì)胞培養(yǎng)的一般過程如下:一、準(zhǔn)備工作準(zhǔn)備工作對(duì)開展細(xì)胞培養(yǎng)異常重要,工作量也較大,應(yīng)給予足夠的重視,推備工作中某一環(huán)節(jié)的疏忽可導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗或無(wú)法進(jìn)行。準(zhǔn)備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗、干燥與消毒,培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌,無(wú)菌室或超凈臺(tái)的清潔與消毒,培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試。
介紹洗滌ELISA平板的技巧2023/09/08
優(yōu)化ELISA的重點(diǎn)之一在于洗滌。洗滌步驟可降低未結(jié)合抗體所引起的背景信號(hào),從而增加分析的信噪比。每一步之間的洗滌確保只有特異的結(jié)合事件被保留,在最后一步產(chǎn)生信號(hào)。而不充分的洗滌會(huì)導(dǎo)致差異和高背景,從而帶來(lái)不理想的結(jié)果。下面介紹一些利用自動(dòng)洗板機(jī)來(lái)洗滌ELISA平板的技巧。1、洗滌參數(shù):第一個(gè)主要的參數(shù)是洗滌量。自動(dòng)洗板機(jī)會(huì)分配洗滌液。如果你之前遭遇過高背景,那么不要猶豫,將洗滌量調(diào)為高,最好是比包被體積更高。太少的洗滌液會(huì)讓一部分分析表面洗滌不到,從而明顯增加背景。所有反應(yīng)孔的洗滌量必須相同。
標(biāo)準(zhǔn)溶液作為基準(zhǔn)物質(zhì)的要求2023/08/28
標(biāo)準(zhǔn)溶液是指已知準(zhǔn)確濃度的溶液,它是滴定分析中進(jìn)行定量計(jì)算的依據(jù)之一。不論采用何種滴定方法,都離不開標(biāo)準(zhǔn)溶液。因此,正確地配制標(biāo)準(zhǔn)溶液,確定其準(zhǔn)確濃度,妥善地貯存標(biāo)準(zhǔn)溶液,都關(guān)系到滴定分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。配制標(biāo)準(zhǔn)溶液的直接配制法一般如下:用分析天平準(zhǔn)確地稱取一定量的物質(zhì),溶于適量水后定量轉(zhuǎn)入容量瓶中,稀釋至標(biāo)線,定容并搖勻。根據(jù)溶質(zhì)的質(zhì)量和容量瓶的體積計(jì)算該溶液的準(zhǔn)確濃度。能用于直接配制標(biāo)準(zhǔn)溶液的物質(zhì),稱為基準(zhǔn)物質(zhì)或基準(zhǔn)試劑,它也是用來(lái)確定某一溶液準(zhǔn)確濃度的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。作為基準(zhǔn)物質(zhì)必須符合下列要求:
培養(yǎng)基滅菌效果取決因素解讀2023/08/21
培養(yǎng)基滅菌,影響因素很多,除了培養(yǎng)基內(nèi)雜菌的種類和數(shù)量,滅菌溫度的高低,時(shí)間長(zhǎng)短外,還取決于:1.營(yíng)養(yǎng)成分的保持濕熱滅菌時(shí),微生物被殺死的同時(shí),培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分也遭到了一定的破壞,特別是氨基酸和維生素。如在121℃,僅20min,就有59%的賴氨酸和精氨酸及其他堿性氨基酸被破壞,蛋氨酸和色氨酸也有相當(dāng)數(shù)量被破壞。在熱的作用下某些營(yíng)養(yǎng)成分還可能因受熱而相互之間發(fā)生反應(yīng),造成培養(yǎng)基中原有營(yíng)養(yǎng)成分的數(shù)量變化,因而影響培養(yǎng)基質(zhì)量。2.微生物的耐熱性細(xì)菌芽孢的熱阻較大,滅菌所需要的時(shí)間取決于把細(xì)菌芽孢減少
細(xì)胞因子生物學(xué)特點(diǎn)及功能2023/08/16
細(xì)胞因子(CK)是由活化免疫細(xì)胞和非免疫細(xì)胞(如某些基質(zhì)細(xì)胞)合成分泌的能調(diào)節(jié)細(xì)胞生理功能、參與免疫應(yīng)答和介導(dǎo)炎癥反應(yīng)等多種生物學(xué)效應(yīng)的小分子多肽或糖蛋白,是不同于免疫球蛋白和補(bǔ)體的又一類免疫分子。根據(jù)來(lái)源zui初將活化淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子稱為淋巴因子(LK),將單核-吞噬細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子稱為單核因子(MK)。目前根據(jù)功能,細(xì)胞因子大致分為以下六類:白細(xì)胞介素;干擾素(IFN);腫瘤壞死因子(TNF);集落刺激因子(CSF);生長(zhǎng)因子和趨化因子。細(xì)胞因子生物學(xué)功能:1.介導(dǎo)和調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答2.
熒光定量PCR中各個(gè)環(huán)節(jié)的對(duì)照2023/08/07
對(duì)照的目的是對(duì)檢測(cè)的各個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行監(jiān)控,因此我們按照檢測(cè)的流程對(duì)對(duì)照進(jìn)行梳理。常規(guī)熒光定量PCR的流程是:樣品采集-運(yùn)輸-樣品處理-核酸提取-反轉(zhuǎn)錄(RNA病毒)-擴(kuò)增-結(jié)果讀取。下面看看各個(gè)環(huán)節(jié)都可以使用哪些對(duì)照?1.陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照是指在相同的處理?xiàng)l件下,比如一份已知的感染樣品和一份已知的未感染樣品,都進(jìn)行了提取和擴(kuò)增最終獲得了陽(yáng)性結(jié)果和陰性結(jié)果。陰陽(yáng)性對(duì)照強(qiáng)調(diào)處理過程與樣品一致,并且有明確的預(yù)期結(jié)果。2.擴(kuò)增對(duì)照我們通常說(shuō)的陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照指的是擴(kuò)增試劑盒中附帶的不需要
血清使用實(shí)驗(yàn)人必看注意事項(xiàng)2023/08/01
細(xì)胞培養(yǎng)液中添加的血清有牛血清、馬血清、人血清等,其中牛血清是zui常用的血清,分為胎牛血清和新生小牛血清。胎牛血清是從母牛破腹取出的胎牛中分離出的血清,價(jià)格昂貴。新生小牛血清是從剛出生的尚未哺乳的小牛中分離出來(lái)的血清,如廠家能做到這一點(diǎn),新生小牛血清的質(zhì)量與胎牛血清的質(zhì)量相差不大。如小牛出生后已哺乳,從這種小牛中取出的血清中可能含有較多的生物活性物質(zhì),其質(zhì)量明顯不如前兩種。血清的質(zhì)量,種類及使用的濃度都有可能影響細(xì)胞的生長(zhǎng),而不同批次的血清支持細(xì)胞生長(zhǎng)的能力也不同,尤其是對(duì)克隆細(xì)胞的生長(zhǎng),某些
胎牛血清和小牛血清不同表現(xiàn)2023/07/24
小牛血清(或新生牛血清)是從出生2周左右牛齡的小牛中獲得的,是一種經(jīng)濟(jì)有效的胎牛血清替代品。血清通常用作細(xì)胞生長(zhǎng)的添加物,擁有多種功能和用途,如:富含大分子蛋白,低分子量的營(yíng)養(yǎng)素,作為氨基酸、碳水化合物、維生素的額外來(lái)源;提高介質(zhì)的緩沖能力;可結(jié)合或中和有毒成分;減少細(xì)胞氧化應(yīng)激,減少細(xì)胞凋亡;提供促進(jìn)生長(zhǎng)的因子,有助細(xì)胞適應(yīng)培養(yǎng)環(huán)境。小牛血清提供許多與胎牛血清相同的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),蛋白質(zhì)和免疫球蛋白水平稍高,但生長(zhǎng)因子較少,適合培養(yǎng)容易培養(yǎng)或?qū)ε囵B(yǎng)環(huán)境要求低的細(xì)胞。胎牛血清是應(yīng)用廣泛的細(xì)胞培養(yǎng)添加物
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