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挑選適合細胞生長的血清幾個方法2023/01/16

血清是一種純天ran培養基，含有細胞生長繁殖所需的多種營養成分，如蛋白質、多肽等，多用于細胞培養、生物制品及診斷試劑的。血清的主要成分是蛋白質，血清的組成成分與含量常常與供血動物性別、年齡、生理條件和營養條件有關。那么，如何挑選適合細胞生長的血清？總結幾點方法如下：1.看產地不同產地的胎牛血清，品質也是相差甚遠。值得注意的是，胎牛血清是動物源生物制品，我國對于動物源制品的進口一直有很嚴格的規定，目前我國批準進口的胎牛血清來源是澳大利亞、新西蘭和烏拉圭，合法正規途徑進口的胎牛血清必須在產品包裝上標

中和抗體ELISA檢測試劑盒實驗步驟2023/01/10

中和抗體ELISA檢測試劑盒利用競爭法ELISA原理，當樣本中存在中和抗體時與刺突RBD蛋白結合，從而阻止了RBD與預包被板底的ACE2蛋白的結合，用于病毒中和抗體的定量檢測。實驗步驟：1.將100ul2ug/mlACE2加入至每孔，4℃孵育過夜；2.第二天，50ul稀釋好的樣本+50ul刺突RBD蛋白混合后，室溫孵育2h；3.包被后，移除孔中的ACE2蛋白，加入稀釋好的封閉液，室溫封閉1h；4.移除孔中的封閉液，用200ulwashbuffer洗滌一次；5.將孵育好的樣本+刺突RBD蛋白混合液

細胞培養基本操作過程2023/01/05

細胞培養技術指的是細胞在體外條件下的生長，在培養的過程中細胞不再形成組織（動物）。培養物是單個細胞或細胞群。細胞在培養時都要生活在人工環境中，由于環境的改變，細胞的移動或受一些其他因素的影響，培養時間加長，傳代導致細胞出現單一化型。細胞培養基本操作過程以下幾點：1.準備工作：準備工作的內容包括器皿的清洗、干燥與消毒，培養基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無菌室或超凈臺的清潔與消毒，培養箱及其他儀器的檢查與調試。2.取材：在無菌環境下從機體取出某種組織細胞(視實驗目的而定)，經過一定的處理(如消化分

標準品梯度稀釋解析2022/12/19

下面標準品梯度稀釋解析:1、標準品稀釋液的選擇：若血清、血漿、組織勻漿樣本，用試劑盒中的標準品稀釋液，梯度稀釋標準品。若細胞上清樣本，建議用細胞培養基梯度稀釋標準品。2、耗材準備：準備8個1.5Ml離心管，寫上S1-S7、空白。3、梯度稀釋：根據說明書，每管加入等體積的標準品稀釋液（培養基）。吸取同體積溶解好的標準品到S1管中，吹打10次混勻，渦旋5S。從S1管中吸取同體積溶液到S2管，吹打10次混勻，渦旋5s。同法稀釋S3-S7濃度。4、空白:標準品稀釋液（培養基）作為空白即零濃度。注意：梯度

蛋白酶抑制劑的作用解讀2022/12/13

蛋白酶抑制劑從廣義上指與蛋白酶分子活性中心上的一些基團結合，使蛋白酶活力下降，甚至消失，但不使酶蛋白變性的物質。從放線菌發酵液中分離到亮肽素、抗痛素、糜蛋白酶抑素、抑彈性蛋白酶醛、抑胃蛋白酶素、磷酰胺素等，能分別抑制胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、糜蛋白酶、彈性蛋白酶、胃蛋白酶、金屬蛋白酶等各種蛋白酶。都屬于蛋白酶抑制劑。蛋白酶抑制劑的作用特點：是基于肽類的化合物，它們或競爭性抑制蛋白酶活性或作為互補蛋白酶活性點的抑制劑。這類藥wu能抑制蛋白酶的活性，其主要作用于艾滋病病毒復制的后階段，由于蛋白酶被抑制，

小鼠ELISA試劑盒收集標本注意事項2022/12/06

ELISA的檢測目的是為了實驗提供準確的實驗依據，為了保證實驗數據的可靠性，在實驗過程中必須堅持全面的質量控制和全過程質量控制，在收集標本前都必須有一個完整的計劃。1、每個樣本量收集體積=100ulx檢測種類，如果要做復孔，標本量收集體積=100ulx檢測種類x2。2、樣本收集后若在一周內進行檢測可保存于2-8°C，若不及時檢測，請進行分裝，凍存于-20°或-80°C，避免反復凍融3、試劑盒的檢測范圍不等同于樣本中待測物的濃度范圍，建議實驗前通過相關文獻預估樣本中待測物的濃度并通過預實驗確定樣本

RT-PCR反應靈敏度提高具體方式2022/11/25

PCR是一種選擇性體外擴增DNA或RNA片段的方法，即通過試管中進行的DNA復制反應，使極少量的基因組DNA或RNA樣品中特定基因片段在短短幾小時內擴增上百萬倍。簡單說，就是我們在體外模仿體內DNA復制的過程，混合DNA模板、合適的引物、足夠的4種dNTP、耐熱DNA聚合酶以及適宜的體系后，在一定溫度和時間條件下，進行的DNA擴增。PCR有很多種，其中RT-QPCR(實時熒光定量)原理：基于PCR反應的技術提升與延伸，有染色法和熒光探針法。RT-PCR反應體系的靈敏度提高具體方式有以下幾種：1、

化學實驗室個人防護措施及安全注意事項2022/11/14

在實驗室做實驗，一定要注意實驗的安全，畢竟化學藥品大多數都是電郵一定毒性的，一旦出現問題，影響不容小覷，甚至可能會危及生命。化學實驗室個人防護措施：1、眼睛及臉部的防護（1）、全防護眼鏡（眼睛及臉部是實驗室中最易被事故所傷害的部位，因而對他們的保護尤為重要。實驗室內，氖實驗人員必須戴安全防護眼鏡（2）、當化學物質濺入眼睛后，應立即用水徹di沖洗。沖洗時，應將眼皮撐開，小心地用自來水沖洗數分鐘，再用蒸餾水沖，然后去醫務室進行治療。（3）、面部防護用具用于保護臉部和喉部。為了防止可能的爆炸及實驗產生

細胞培養實用技巧小結2022/11/07

細胞培養是指將細胞從動物或植物體內取出，然后在適宜的人工環境中生長的過程。細胞可以在培養前直接從組織中取出并通過酶或機械方法進行解離，也可以來源于已建立的細胞系或細胞株。一、細胞培養實用技巧:1.買細胞要去靠譜的地方買，比如ATCC或者素冉生物。一般上面會有針對細胞的介紹，這樣培養之前可以了解細胞正常生長的狀態圖、傳代、培養基的類型等。2.不管是買的細胞，還是別人惠贈的細胞，剛拿到手趕緊的做兩件事：檢測是否有支原體污染;迅速擴增凍存，凍存細胞復蘇后第二天*更換一次培養基。3.發現細胞有污染迅速處

ELISA實驗樣本的保存與處理2022/11/01

ELISA實驗過程中除了選擇靈敏度高的ELISA試劑盒之外，處理樣本的方法也是不一樣的。ELISA實驗中常見液體類樣本有血清、血漿、尿液、細胞上清、腦脊液等幾種。一、ELISA樣本的保存正常情況下，再5天內測定的血清標本可放置于4°C，標本再冰箱中保存時間過長會導致血清IgG聚合，是間接法的試劑本底加深，超過一周測定的需-20°C保存，凍結血清溶解后，蛋白質局部濃縮，分不均，應充分混勻并避免產生氣泡，渾濁或有沉淀的血清標本應先離心或過濾，澄清后再檢測。測抗體的血清的標本如需保存作多次檢測，以少量

驗證生化試劑盒是否適合使用方法2022/10/24

通常生化試劑盒可分為液體單試劑和液體雙試劑，前者特別適用于半自動生化分析儀和小型自動生化分析儀，使用方便，缺點是穩定性較差。與單試劑相比，雙試劑提高了抗干擾能力，具有穩定性能較好，可消除樣品自身空白等特點。此外還有多項同測組合試劑、濃縮試劑等。對新的試劑盒，我們首先要查看其資質是否齊全，是否為合法有效試劑，是否有相關的臨床試驗驗證等。其次，在本實驗室，可做以下工作來進行驗證是否適合使用。一、試劑空白吸光度用蒸餾水做空白，用zhi定的空白液加入試劑作為樣品測試，在測試主波長下，記錄測試啟動時的吸光

?PCR反應污染原因與對策2022/10/17

PCR反應的最大特點是具有較大擴增能力與很高的靈敏性，但令人頭痛的問題是易污染，極其微量的污染即可造成假陽性的產生。一、污染原因1、標本間交叉污染:標本污染主要有收集標本的容器被污染，或標本放置時，由于密封不嚴溢于容器外，或容器外粘有標本而造成相互間交叉污染;標本核酸模板在提取過程中，由于吸樣槍污染導致標本間污染;有些微生物標本尤其是病毒可隨氣溶膠或形成氣溶膠而擴散，導致彼此間的污染。2、PCR試劑的污染:主要是由于在PCR試劑配制過程中，由于加樣槍、容器、雙蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染.

ELISA實驗中洗板機洗板關鍵點2022/10/10

洗板機洗板人為因素少，速度快，條件恒定，但是使用洗板機洗板時應注意以下三個關鍵點。1、洗滌參數主要的參數是洗滌量。自動洗板機會分配洗滌液。如果你之前遭遇過高背景，那么不要猶豫，將洗滌量調為高，最好是比包被體積更高。太少的洗滌液會讓一部分分析表面洗滌不到，從而明顯增加背景。所有反應孔的洗滌量必須相同。江萊生物ELISA試劑盒的使用手冊中列出包被量。我們建議使用350µl洗滌液進行洗滌，以便清潔整個反應孔的壁。一般來說，洗滌量越高，則孵育步驟殘留的抗體或抗原量就越少。2、洗滌次數影響洗滌效果的主要參

關于抗體功能分類簡介2022/10/05

抗體是哺乳動物適應性免疫系統對抗病原體的核心，它是在病原體刺激下由漿細胞（效應B細胞）所分泌的一種免疫球蛋白，能夠識別并結合特異的病原體抗原，隨后通過介導中和作用、調理作用、效應T細胞殺傷等來清除病原體。機體在抗原物質刺激下，由B細胞分化成的漿細胞所產生的、可與相應抗原發生特異性結合反應的免疫球蛋白。因為初有人用電泳證明血清中抗體活性在γ球蛋白部分，故曾把抗體統稱為兩種(γ)球蛋白。后來證明，抗體并不都在γ區;而且位于γ區的球蛋白，也不一定都具有抗體活性。1964年，世界衛生組織舉行專門會議，將

細胞周期的測定原理與操作步驟2022/09/26

細胞周期的測定原理與操作步驟：一、原理1、細胞周期指細胞一個世代所經歷的時間。從一次細胞分裂結束到下一次分裂結束為一個周期。細胞周期反應了細胞增殖速度。2、單個細胞的周期測定可采用縮時攝影的方法，但它不能代表細胞群體的周期，故現多采用其他方法測群體周期。3、測定細胞周期的方法很多，有同位素標記法、細胞計數法等，這里介紹一種利用BrdU滲入測定細胞周期的方法。4、BrdU（5-溴脫氧尿嘧啶核苷）加入培養基后，可做為細胞DNA復制的原料，經過兩個細胞周期后，細胞中兩條單鏈均含BrdU的DNA將占l/

標準新生牛血清保存與注意事項2022/09/19

標準新生牛血清(輻照滅菌)保存：1.需要保存的血清，必須存儲于-20℃至-70℃低溫冰箱中。4℃冰箱保存請勿超過一個月時間。由于血清結冰時體積會增加約10%，因此在凍存之前，必須預留一定的體積空間，以免發生污染或玻璃瓶破裂；2.血清的熱滅活在56℃溫度中加熱30分鐘，加熱過程中必須搖晃均勻。熱滅活的目的是使血清中的補體成分滅活，除非必須，不建議做這樣的處理，因為這會導致血清沉淀物顯著增多，從而影響血清質量。補體參與反應有：細胞毒作用、平滑肌細胞收縮、肥大細胞和血小板釋放組胺、增強吞噬作用、促進淋

上海撫生為大家介紹PCR反應的引物2022/09/13

引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則：1、引物長度：5-30bp，常用為20bp左右。2、引物擴增跨度：以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至0kb的片段。3、引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現非特異條帶。ATGC隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串

溶液配制步驟與注意事項2022/09/05

溶液、試劑的穩定性和準確度是保證理化分析質量的前提，受到各實驗室的高度重視。但母液、標準物質往往不能直接用于實驗分析，需要配制成不同濃度的標準溶液才能使用。配制后的試劑、溶液保存期因實驗室環境、溶劑、器皿潔凈度、密封程度、使用頻次等條件而不一致，檢測標準或證書一般未作詳細規定，給理化實驗室標準溶液的管理帶來不便。由于各實驗室標準溶液存放條件相對固定，使用En值確定所使用標準溶液有效期，為大家定量確定溶液、試劑的有效期提供一種方法。溶液配制步驟:1.計算:計算配制所需固體溶質的質量或液體濃溶液的體

單克隆抗體基本概念2022/08/30

抗體(antibody)是一種通過效應B細胞（漿細胞）分泌，用來鑒別和清除外源物質如細菌、病毒等的一種“Y”形免疫球蛋白。通常，天然抗體具有2條較長、相對分子量較大的重鏈（H鏈），以及2條較短、相對分子量較小的輕鏈（L鏈）。鏈間由二硫鍵和非共價鍵連接形成一個的單體分子。按照生物學特征，整個抗體可進一步分為恒定區（C區）和可變區（V區）兩部分。由于自然界中存在各種各樣的病原體，而這些病原體的表面又存在諸多不同的蛋白質，抗體要識別它們，其“Y”形結構的兩端部分（也就是其可變區）也相應是千變萬化的，從

PCR擴增儀的分類及性能指標2022/08/15

PCR擴增儀的種類總體來說，可以分成兩大類，即普通PCR擴增儀和實時熒光定量PCR擴增儀。一、普通PCR擴增儀1.普通PCR擴增儀即通常所謂的定性PCR擴增儀。2.梯度PCR儀是由普通PCR儀衍生出的帶梯度PCR功能的基因擴增儀。3.原位PCR儀是由普通PCR儀衍生出的帶原位擴增功能的基因擴增儀。二、實時熒光定量PCR擴增儀1.金屬板式實時定量PCR儀，還可作為普通PCR儀使用，有的甚至帶梯度功能，可容納的樣本量大，無需特殊耗材，但溫度均一性欠佳，有邊緣效應，標準曲線的反應條件難以做到與樣品*一