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浙江聯(lián)碩生物科技有限公司
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在PCR反應(yīng)體系中添加劑DMSO的作用2024/05/16
DMSO主要用于高GC含量的模板擴(kuò)增,可能的機(jī)理是改善GC含量高的DNA的變形情況,降低其二級結(jié)構(gòu),使得聚合酶在二級結(jié)構(gòu)處延伸。DMSO可以提高PCR的特異性,幫助擴(kuò)增一些難擴(kuò)的模板。當(dāng)體系中加入DMSO時(shí),可適當(dāng)降低退火溫度。在實(shí)踐中,聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)可能因各種原因而失敗,通常表現(xiàn)為兩個問題,一是目的模板的擴(kuò)增量太少,二是非目的基因擴(kuò)增太多。這種情況研究人員通常會在反應(yīng)體系中加入合適的添加劑進(jìn)行解決。通常添加劑的作用主要是降低基因的二級結(jié)構(gòu)或者降低非特異性的啟動。下面是幾種常用的添加劑以及它們的
凍存管的使用注意事項(xiàng)2024/03/14
凍存管保存環(huán)境1、未經(jīng)使用的凍存管可在室溫或2-8℃保存12個月。2、已經(jīng)接種的凍存管在-20℃保存,12個月內(nèi)可有良好的菌株保存效果。3、已經(jīng)接種的凍存管在-80℃保存,24個月內(nèi)可有良好的菌株保存效果。凍存管保存時(shí)間1、未經(jīng)使用的凍存管可在室溫或2-8℃保存。2、已經(jīng)接種的凍存管在-20℃或-80℃保存。凍存管的使用步驟1、從細(xì)菌純培養(yǎng)物中挑取新鮮培養(yǎng)物配成大約為3-4麥?zhǔn)媳葷岫鹊木鷳乙航臃N與菌種保存管中。2、擰緊保存管,來回顛倒4-5次使細(xì)菌乳化,不能旋搖。3、把保存管放入冰箱保存-20℃
酶標(biāo)板分類與性能判斷2024/02/27
酶標(biāo)板作為ELISA檢測實(shí)驗(yàn)中的輔材,起著舉足輕重的作用并直接影響最終實(shí)驗(yàn)結(jié)果,酶標(biāo)板的好壞主要取決于其對蛋白吸附的靈敏度、板孔間蛋白吸附能力差異以及所采購酶標(biāo)板批次間的差異。因此,選擇一款蛋白吸附靈敏度高、對蛋白吸附能力孔間差異小、批次間差異小的酶標(biāo)板產(chǎn)品,是實(shí)驗(yàn)者獲得可靠、穩(wěn)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果的保障。酶標(biāo)板分類:根據(jù)不同的分類標(biāo)準(zhǔn),酶標(biāo)板有著不同的分類。一、根據(jù)孔數(shù),可分為96孔、48孔等,由于酶標(biāo)板主要是配合酶標(biāo)儀用,目前市面上的酶標(biāo)儀最多為96孔,因此酶標(biāo)板最為常用的也是96孔。二、根據(jù)其底部的
冰凍切片包埋劑的制備方法2024/02/19
冰凍切片是一種在低溫條件下使組織快速冷卻到一定硬度,然后進(jìn)行切片的方法。因其制作過程較石蠟切片快捷、簡便,而多應(yīng)用于手術(shù)中的快速病理診斷。制備步驟:將組織在恒溫冷凍機(jī)里面切片。冷凍腔內(nèi)的溫度一般設(shè)置為-18℃至-25℃,根據(jù)不同組織調(diào)節(jié)不同腔溫,平時(shí)應(yīng)將冷凍頭放置在冷凍臺上。冷凍切片機(jī)應(yīng)長期處在冷凍恒溫狀態(tài)。1、當(dāng)冰凍組織提取好之后,在冷凍頭上放少量的OCT或羧田基纖維素(可用普通膠水代替),放上組織,速凍。2、待組織凍結(jié)后,將冷凍頭裝刀切片機(jī)上。3、粗切,修出切面細(xì)切幾張,用毛筆刷去刀上組織片
夾心Elisa和競爭性Elisa的區(qū)別2024/01/30
什么是夾心ELISA?夾心ELISA是一種常用于檢測和定量免疫測定中抗原的ELISA。它是一種酶聯(lián)免疫吸附測定,使用兩種抗體:捕獲抗體和檢測抗體。在這種技術(shù)中,樣品中的抗原在抗體之間結(jié)合。ELISA的目的是檢測樣品中靶抗原的存在。因此,在夾心ELISA的情況下,靶抗原在捕獲抗體和檢測抗體之間結(jié)合。在程序開始時(shí),捕獲抗體已經(jīng)固定在表面上。然而,檢測抗體是定量前的最后一步。夾心ELISA中的兩種抗體結(jié)合到靶抗原上的不同位置。此外,捕獲抗體和靶標(biāo)抗體不干擾彼此的結(jié)合能力非常重要。夾心ELISA中的步驟
ELISA試劑盒標(biāo)曲顯色過強(qiáng)無明顯梯度2024/01/23
1、主要懷疑點(diǎn):洗板不充分:1.1、機(jī)器洗版:確保機(jī)器設(shè)置的針頭能吸干孔中液體,并且加液針頭能加液大于350ul,加液針頭沒有被異物或者結(jié)晶鹽堵住。1.2、手動洗板,嚴(yán)格按照步驟,使用干凈滅菌的槍頭和加樣槽,使用無氧化劑的吸水紙。加350ul洗液,靜置90秒,在吸水紙上拍干孔中液體后再加入下一步洗液或者試劑。1.3、特別注意,在加入TMB前的洗板步驟極其重要,殘留的HRP酶會直接導(dǎo)致TMB顯色。2、次要懷疑點(diǎn):2.1、TMB已經(jīng)污染,檢測TMB是否透明無色,如果偏藍(lán)就是污染了。2.2、檢查配制洗
CCK-8 細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)2024/01/16
實(shí)驗(yàn)步驟:1.種板數(shù):根據(jù)你摸索的,或者查閱文獻(xiàn)確定你需要的種板濃度,根據(jù)種板濃度對細(xì)胞懸液進(jìn)行稀釋,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入約1000-2000個細(xì)胞100ul,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入約5000~10000個細(xì)胞100ul(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。2.種板:以96孔板為例,96孔板橫向是1-12的數(shù)字,縱向是A-H,可做多個實(shí)驗(yàn)組,每組設(shè)置4-6個復(fù)孔,同時(shí)設(shè)置空白組,最邊緣孔加入PBS緩沖液減少蒸發(fā)帶來的影響,然后將細(xì)胞置于37℃5%CO2細(xì)胞培
透析的原理和過程2024/01/09
一、透析的原理透析只需要使用專用的半透膜即可完成。通常是將半透膜制成袋狀,將生物大分子樣品溶液置入袋內(nèi),將此透析袋浸入水或緩沖液中,樣品溶液中大分子量的生物分子被截留在袋內(nèi),而鹽和小分子物質(zhì)不斷擴(kuò)散透析到袋外,直到袋內(nèi)外兩邊的濃度達(dá)到平衡為止。保留在透析袋內(nèi)未透析出的樣品溶液稱為“保留液”,袋(膜)外的溶液稱為“滲出液”或“透析液”。透析的動力是擴(kuò)散壓,擴(kuò)散壓是由橫跨膜兩邊的濃度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度,正比于欲透析的小分子溶質(zhì)在膜內(nèi)外兩邊的濃度梯度,還正比于膜的面積和溫度,通常是4
ELISA實(shí)驗(yàn)原理2024/01/03
ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn))是一種常用的生物化學(xué)分析技術(shù),可用于判斷受檢標(biāo)本中是否含有待檢測抗原或抗體,是免疫反應(yīng)的定性和定量檢測方法,也是許多科研人員的日常實(shí)驗(yàn)之一。原理酶標(biāo)儀的主要操作是使用光電比色計(jì)或分光光度計(jì),測量光通過測試樣品前后的能量差。測試物質(zhì)吸收引起的光能差通常與測試物質(zhì)的濃度線性相關(guān)。酶標(biāo)儀的波長范圍通常為400nm至750nm,并受濾光片或衍射光柵(納米)限制。光學(xué)系統(tǒng)中通過光纖為含有樣品的微孔板孔提供光。穿過樣品的光束直徑范圍為1至3毫米,樣品發(fā)出的光由檢測裝置檢測,檢測
冰凍切片包埋劑的制備方法及注意事項(xiàng)2023/12/26
制備步驟:將組織在恒溫冷凍機(jī)里面切片。冷凍腔內(nèi)的溫度一般設(shè)置為-18℃至-25℃,根據(jù)不同組織調(diào)節(jié)不同腔溫,平時(shí)應(yīng)將冷凍頭放置在冷凍臺上。冷凍切片機(jī)應(yīng)長期處在冷凍恒溫狀態(tài)。1、當(dāng)冰凍組織提取好之后,在冷凍頭上放少量的OCT或羧田基纖維素(可用普通膠水代替),放上組織,速凍。2、待組織凍結(jié)后,將冷凍頭裝刀切片機(jī)上。3、粗切,修出切面細(xì)切幾張,用毛筆刷去刀上組織片。4、放下抗卷板,開始切片,切片速度一般為5-6微米,切出的片子用載玻片貼附后立即放入甲醇冰醋/酸液(97ml甲醇+3ml冰醋/酸)中固定
PCR常見問題2023/12/21
1.無擴(kuò)增條帶(1)酶失活或在反應(yīng)體系中未加入酶。TaqDNA聚合酶因保存或運(yùn)輸不當(dāng)而失活,往往通過更換新酶或用另一來源的酶以獲得滿意的結(jié)果。(2)模板含有雜質(zhì)。特別是對甲醛固定及石蠟包埋的組織常含甲酸,造成DNA脫嘌呤而影響PCR的結(jié)果。(3)變性溫度是否準(zhǔn)確:PCR儀指示溫度與實(shí)際溫度是否相符,過高酶在前幾個循環(huán)就迅速失活;過低則模板變性不好。(4)反應(yīng)系統(tǒng)中污染了蛋白酶及核酸酶,應(yīng)在未加Taq酶以前,將反應(yīng)體系95℃加熱5-10分鐘。(5)引物變質(zhì)失效。人工合成的引物是否正確。是否純化,或
ELISA 是如何工作的?2023/12/14
ELISA基于特異性抗原抗體反應(yīng),通常用到的是固相酶聯(lián)免疫吸附方法,這里以*使用的夾心法為例,其基本步驟為:將包被抗體固定在微孔板表面從板上洗去未被結(jié)合抗體加入質(zhì)控抗原或含有目標(biāo)物的樣本洗去其他雜蛋白,加入標(biāo)記的檢抗添加酶特異性底物,產(chǎn)生有色產(chǎn)物,使用酶標(biāo)儀進(jìn)行比色測定即可辣根過氧化物酶(HRP)或堿性磷酸酶是ELISA中常用的酶,而底物包括四甲基聯(lián)苯胺(TMB)或2,2'-疊氮基-雙-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)。通常選擇重復(fù)或三次采樣,并且使用不同濃度的樣品以確保生物學(xué)上可接受的
移液槍校準(zhǔn)步驟詳解2023/12/13
需要用到的儀器:電子分析天平(檢測范圍200g,指示值為0mg);一個量杯(50L);一個量杯(100ml);多個小塊定性濾紙;超純水系統(tǒng)80mL。步驟:1、打開電子天平,電子天平調(diào)零;2、天平稱指示穩(wěn)定后,按住歸零鍵歸零。將移液管噴嘴安裝在移液管上,對移液器進(jìn)行清洗;3、將移液器的體積調(diào)整到檢查點(diǎn)。通常選擇具有最小、中等和較大容量值的檢查點(diǎn)??梢允翘囟ǖ娜萘奎c(diǎn);4、用移液管將檢測到容量的超純水系統(tǒng)轉(zhuǎn)移到天平的小量杯中;5、天平指示穩(wěn)定后,立即加載并記錄電子分析天平指示的標(biāo)準(zhǔn)值。記錄的結(jié)束會使電
CCK8試劑盒操作指南2023/12/08
制作標(biāo)準(zhǔn)曲線1、計(jì)數(shù),按比例依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細(xì)胞濃度梯度,一般要做5-7個細(xì)胞濃度梯度,每組4-6個復(fù)孔。2、接種后培養(yǎng)2-4小時(shí)使細(xì)胞貼壁,然后每100μL培養(yǎng)基加10uLCCK-8(注意不要在孔中生成氣泡,會影響OD值)試劑培養(yǎng)一定時(shí)間后測定OD值,在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培育1-4小時(shí)。用酶標(biāo)儀測定450nm處的吸光度。計(jì)算所需培養(yǎng)液可以先轉(zhuǎn)染再種板在10cm盤轉(zhuǎn)染,6h后消化,重懸細(xì)胞,技術(shù),調(diào)細(xì)胞密度為20000個/ml,種在96孔板,每孔1000μL。種板時(shí),槍頭吹吸細(xì)胞,重懸,
培養(yǎng)皿的使用方式和注意事項(xiàng)2023/11/27
1、注意事項(xiàng):使用前經(jīng)過清潔消毒,,培養(yǎng)皿清潔與否對工作影響較大,可影響培養(yǎng)基的酸堿度,若有某些化學(xué)藥品的存在,會抑制細(xì)菌生長。新購的培養(yǎng)皿應(yīng)先用熱水沖洗,再置于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%或2%的鹽酸溶液中浸泡數(shù)小時(shí),使游離堿性物質(zhì)除去,再用蒸餾水沖洗2次。若要培養(yǎng)細(xì)菌,再用高壓蒸氣(一般6.8*10的5次方Pa高壓蒸氣),120°C的溫度下30min滅菌,置室溫干燥,或用干熱滅菌,就是將培養(yǎng)皿置于烘箱內(nèi),度控制在120°C左右的情況下維持2h,殺死細(xì)菌的胞牙。經(jīng)過消毒的培養(yǎng)皿才能接種培養(yǎng)使用。2、使用方法
免疫熒光實(shí)驗(yàn)步驟2023/11/23
基本實(shí)驗(yàn)步驟:(1)細(xì)胞準(zhǔn)備。對單層生長細(xì)胞,在傳代培養(yǎng)時(shí),將細(xì)胞接種到預(yù)先放置有處理過的蓋玻片的培養(yǎng)皿中,待細(xì)胞接近長成單層后取出蓋玻片,PBS洗兩次;對懸浮生長細(xì)胞,取對數(shù)生長細(xì)胞,用PBS離心洗滌(1000rpm,5min)2次,用細(xì)胞離心甩片機(jī)制備細(xì)胞片或直接制備細(xì)胞涂片。(2)固定。根據(jù)需要選擇適當(dāng)?shù)墓潭▌┕潭?xì)胞。固定完畢后的細(xì)胞可置于含疊氮納的PBS中4℃保存3個月。PBS洗滌3×5min.(3)通透。使用交聯(lián)劑(如多聚甲醛)固定后的細(xì)胞,一般需要在加入抗體孵育前,對細(xì)胞進(jìn)行通透處
ELISA中必要的三個試劑2023/11/21
完整的ELISA試劑盒包含以下各組分:(1)已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);(2)酶標(biāo)記的抗原或抗體(結(jié)合物);(3)酶的底物;(4)陰性對照品和陽性對照品(定性測定中),參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清(定量測定中);(5)酶聯(lián)物(結(jié)合物)及標(biāo)本的稀釋液;(6)洗滌液;(7)酶反應(yīng)終止液。免疫吸附劑已包被抗原或抗體的固相載體在低溫(2~8℃)干燥的條件下一般可保存6個月以上。有些不完整的試盒,僅供應(yīng)包被用抗原或抗體,檢測人員需自行包被。以下簡述固相載體和包被過程。固相載體固相載體在ELISA測定
如何提取、制備胎牛血清?2023/11/16
胎牛血清(FetalBovineSerum,F(xiàn)BS)是在生物醫(yī)學(xué)研究和細(xì)胞培養(yǎng)中廣泛使用的重要生物制品,它含有豐富的生長因子、蛋白質(zhì)和其他生物分子,對細(xì)胞生長和增殖起著至關(guān)重要的作用。制備胎牛血清是一個復(fù)雜的過程,通常由專業(yè)的生物制品公司進(jìn)行,以確保其質(zhì)量和純度。在本文中,我們將介紹一般的胎牛血清制備過程的主要步驟。步驟1:采集胎牛血液制備胎牛血清的第一步是采集胎牛的血液。這需要在專業(yè)場所進(jìn)行,確保采集的胎牛來自健康且受監(jiān)控的牧場。采集血液需要遵循倫理和動物福利的法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)。確保供體是5-8月齡
PCR管、EP管和八聯(lián)排管的區(qū)別2023/11/13
一、PCR管PCR管是生物實(shí)驗(yàn)過程中常用的耗材,例如BBSP的PCR管,主要作用是為PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))實(shí)驗(yàn)提供容器,可以應(yīng)用于突變、測序、甲基化、分子克隆、基因表達(dá)、基因分型、醫(yī)學(xué)、法醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域。常見的PCR管由管體、蓋體組成,管體和蓋體連接在一起。最早的PCR儀沒有熱蓋,PCR過程中管底的液體會蒸發(fā)到頂部,設(shè)計(jì)成凸蓋(即圓形頂)便于蒸發(fā)的液體凝集后流下。但目前的PCR儀基本為熱蓋式,PCR蓋頂部溫度高,底部溫度低,底部的液體不容易蒸發(fā)到頂部,所以大多使用平蓋。二、EP管因?yàn)殡x心管是由Ep
普通干型透析袋,使用前如何預(yù)處理?2023/11/07
預(yù)處理:1、把透析袋剪成適當(dāng)長度(10-20cm)的小段。2、在大體積(500mL)的2%(W/V)的碳酸氫鈉和1mmol/LEDTA(pH=8.0)中將透析袋煮沸10min。3、用蒸餾水清洗透析袋。4、放在500mL的1mmol/LEDTA(pH=8.0)中將之煮沸10min。5、冷卻后,用蒸餾水清洗透析袋。6、置于20%的酒精中,放于4℃冰箱,必須確保透析袋始終浸沒在溶液內(nèi)。從此時(shí)起取用透析袋必須戴手套。7、在使用前要用蒸餾水將透析袋里外加以清洗干凈。使用須知1、某些化學(xué)物質(zhì)會破壞透析袋微孔
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