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分子克隆實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng)和經(jīng)驗(yàn)分享2024/01/16: 簡(jiǎn)介：分子克?。ɑ蚩寺?DNA重組/載體構(gòu)建）技術(shù)是一種在分子水平上操作的技術(shù)，用于將特定的DNA片段從供體生物中分離出來(lái)，然后通過(guò)體外重組、轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)導(dǎo)等方法，將其插入到適合的克隆載體中，并將重組克隆載體引入到合適的寄主體內(nèi)進(jìn)行復(fù)制與擴(kuò)增?？梢詰?yīng)用于蛋白表達(dá)、病毒包裝、基因治療、細(xì)胞治療、mRNA疫苗、RNA干擾、細(xì)胞功能等研究。具體操作流程：一、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）DNA聚合酶以單鏈DNA為模板，借助一小段雙鏈DNA來(lái)啟動(dòng)合成，通過(guò)一個(gè)或兩個(gè)人工合成的寡核苷酸引物與單鏈DNA模板中的一段

載體構(gòu)建及原核表達(dá)2024/01/15: 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模夯虮磉_(dá)是生物學(xué)研究中的重要內(nèi)容之一，而基因表達(dá)載體則是基因表達(dá)研究中十分重要的工具。基因表達(dá)載體是一種能夠?qū)⑼庠椿驅(qū)氲郊?xì)胞中并使其表達(dá)的DNA分子。在細(xì)胞內(nèi)，基因表達(dá)載體可以通過(guò)轉(zhuǎn)錄和翻譯的過(guò)程將外源基因轉(zhuǎn)化為蛋白質(zhì)，從而實(shí)現(xiàn)基因表達(dá)。實(shí)驗(yàn)原理：表達(dá)載體是用來(lái)在受體細(xì)胞中表達(dá)外源基因的載體，原核表達(dá)載體通常為質(zhì)粒，表達(dá)載體除具有克隆載體所具有的性質(zhì)以外，還應(yīng)具有表達(dá)元件（轉(zhuǎn)錄和翻譯所必須的DNA序列）。大腸桿菌表達(dá)載體要求：①有一個(gè)強(qiáng)的啟動(dòng)子及其兩側(cè)的調(diào)控序列；②應(yīng)有SD序列，且

劃痕實(shí)驗(yàn)（細(xì)胞遷移）的實(shí)驗(yàn)流程及經(jīng)驗(yàn)分享2024/01/12: 簡(jiǎn)介：細(xì)胞遷移(Cellmigration)：因其類似體外傷口愈合過(guò)程，又名傷口愈合實(shí)驗(yàn)(Woundhealingassay)，是指細(xì)胞在接收到遷移信號(hào)或感受到某些物質(zhì)的梯度后而產(chǎn)生的移動(dòng)?？捎糜诳梢杂^察藥物、基因等外源因素對(duì)細(xì)胞遷移、修復(fù)和相互作用的影響。原理：在融合的單層細(xì)胞上人為制造一個(gè)空白區(qū)域，稱為“劃痕/傷口”，劃痕邊緣的細(xì)胞會(huì)逐漸進(jìn)入空白區(qū)域使“劃痕/傷口”愈合，于細(xì)胞遷移過(guò)程中在開(kāi)始和定期捕獲圖像，通過(guò)測(cè)量不同時(shí)間點(diǎn)的劃痕間距并計(jì)算差值，可對(duì)細(xì)胞的遷移能力做出判斷。材料及儀器：耗材

突破瓶頸！人源多能性干細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)2024/01/11: 原理：人類多能干細(xì)胞(HPSCs)具有自我更新能力，但在體外對(duì)環(huán)境擾動(dòng)高度敏感，這對(duì)其治療應(yīng)用構(gòu)成了挑戰(zhàn)。迫切需要進(jìn)一步的突破，以確保這些細(xì)胞安全和穩(wěn)健的長(zhǎng)期生長(zhǎng)和功能分化。在這里，通過(guò)高通量篩選策略來(lái)確定一種小分子混合物，它可以提高h(yuǎn)PSCs及其分化后代的生存能力。Chroman1、Emricasan、Polyamines和trans-ISRIB(CEPT)的組合通過(guò)同時(shí)阻斷幾種原本損害細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的應(yīng)激機(jī)制，提高了遺傳穩(wěn)定的hPSCs的細(xì)胞存活率。CEPT為干細(xì)胞研究中的幾個(gè)關(guān)鍵應(yīng)用提供了

如何快速高效從組織細(xì)胞中提取RNA2023/09/06: Starvio組織細(xì)胞RNA提取試劑盒1)采用特制的復(fù)合消化液消化組織中的蛋白質(zhì)。2)采用了最新的離子膜技術(shù)并反復(fù)優(yōu)化了裂解液和洗脫液配方。3)可直接應(yīng)用于Northern雜交、RT-PCR、RealTimeRT-PCR、cDNA文庫(kù)構(gòu)建、體外翻譯等。操作簡(jiǎn)便快速，一般只需20分鐘即可完成RNA提取；提取RNA純度高，無(wú)抑制劑，A260/A280為1.8-2.0。深圳安培生物科技有限公司，是一家具有核心的技術(shù)實(shí)力、壹流的經(jīng)營(yíng)管理水平和完善的市場(chǎng)銷售體系的生物高科技企業(yè)?？偛吭O(shè)在廣東，服務(wù)面向全國(guó)

Starvio-AS 質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染試劑盒介紹2023/09/01: 產(chǎn)品簡(jiǎn)介1、添加了細(xì)胞膜受體配基模擬分子，更容易通過(guò)內(nèi)吞途徑轉(zhuǎn)染入細(xì)胞；2、可高效轉(zhuǎn)染一些較難轉(zhuǎn)染的貼壁細(xì)胞，如肝癌細(xì)胞株、大腸癌細(xì)胞株、腎臟來(lái)源的細(xì)胞株等；3、抗血清干擾，可用于含血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞的轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染前后不需要更換培養(yǎng)液。注意二1、第一次使用，建議進(jìn)行細(xì)胞密度優(yōu)化實(shí)驗(yàn)；2、轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)應(yīng)保持良好，不要有支原體污染；3、按本說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行轉(zhuǎn)染，不使用其它轉(zhuǎn)染試劑的操作步驟；深圳安培生物科技有限公司，是一家具有核心的技術(shù)實(shí)力、壹流的經(jīng)營(yíng)管理水平和完善的市場(chǎng)銷售體系的生物高科技企業(yè)。

Starvio siRNA轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)指南--細(xì)胞狀態(tài)2023/08/24: RNA轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的影響因素有很多，而細(xì)胞狀態(tài)往往是同學(xué)們最容易忽略的一點(diǎn)。如果細(xì)胞狀態(tài)差，那么轉(zhuǎn)染時(shí)就會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞死亡、轉(zhuǎn)染效率低下等結(jié)果。那么關(guān)于細(xì)胞狀態(tài)，我們應(yīng)該注意些什么呢？一、使用凍存復(fù)蘇后，已傳了兩三代的細(xì)胞剛剛復(fù)蘇的細(xì)胞十分脆弱，稍有不慎就會(huì)死亡，因此一切接觸細(xì)胞的動(dòng)作都要盡可能地輕柔。一般而言，細(xì)胞在凍存復(fù)蘇后的一兩代之內(nèi)或直到它們?nèi)繌?fù)蘇之前都很難轉(zhuǎn)染。建議在傳代2-3代后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，此時(shí)的細(xì)胞從解凍過(guò)程中恢復(fù)過(guò)來(lái)，并恢復(fù)正常的生長(zhǎng)速度，狀態(tài)較為穩(wěn)定。二、細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛，形態(tài)正常1、通

淺議RNAi與siRNA轉(zhuǎn)染試劑的應(yīng)用2023/08/23: RNAi（RNAinterference，RNA干擾）是近年來(lái)生命科學(xué)領(lǐng)域最為重大的發(fā)現(xiàn)之一。它是指小分子雙鏈RNA可以特異性地降解同源mRNA,從而抑制或關(guān)閉特定基因表達(dá)的現(xiàn)象。人們只要知道了某種疾病的致病基因，就可以設(shè)計(jì)出針對(duì)該基因mRNA的小分子干擾RNA（SmallinterferingRNA，siRNA），抑制或封閉該致病基因的表達(dá)，從而達(dá)到治療疾病的目的。顯然，在理論上，通過(guò)siRNA可以治療所有的疾病，包括腫瘤、傳染病、遺傳性疾病等等，因而siRNA受到學(xué)術(shù)界普遍的關(guān)注，是目前最為

如何進(jìn)行活體組織mRNA轉(zhuǎn)染2023/08/10: StarviomRNA活體組織轉(zhuǎn)染試劑專門(mén)用于活體動(dòng)物組織和臟器的mRNA介入轉(zhuǎn)染，目標(biāo)轉(zhuǎn)染臟器可以是肝臟、肺臟、乳腺等臟器，也可以是轉(zhuǎn)移瘤、種植瘤、肌肉、骨髓等組織。StarviomRNA使用簡(jiǎn)便，只需將Starvio與mRNA充分混合，再局部注射入靶臟器或靶組織即可。StarviomRNA不僅可以轉(zhuǎn)染活體小鼠，還可以轉(zhuǎn)染活體大鼠和兔子等。操作步驟：A.計(jì)算mRNA的需要量，此mRNA應(yīng)高純處理，適當(dāng)修飾，適于動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)使用。B.計(jì)算StarviomRNA轉(zhuǎn)染試劑需要的劑量，需要Starvi

怎樣選擇合適的血漿游離DNA提取試劑2023/08/09: 1、什么是血漿游離DNA？血漿游離DNA，是指血液中游離于細(xì)胞外的DNA，其來(lái)源主要有三：白細(xì)胞崩解釋放的DNA、壞死組織特別是腫瘤組織釋放入血液的DNA和感染病毒、細(xì)菌的DNA。目前，游離DNA已作為新的生物標(biāo)志物用于臨床孕婦產(chǎn)前診斷、腫瘤檢測(cè)、器官-移植術(shù)后排斥和感染檢測(cè)等領(lǐng)域。2、如何選擇血漿游離DNA的提取試劑？血液中游離DNA含量一般較低，片段較小，不易提取，這大大影響了游離核酸的基因檢測(cè)和各種研究的開(kāi)展。一個(gè)合適的血漿游離DNA提取試劑需要操作簡(jiǎn)單、富集性能好、純度高、產(chǎn)量大等特點(diǎn)。

如何高效將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至A549細(xì)胞2023/08/09: 關(guān)于A549細(xì)胞1：細(xì)胞名稱:人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞(A549細(xì)胞)2：形態(tài)特性:上皮樣，多角形3：生長(zhǎng)特性:貼壁生長(zhǎng)StarVio-A質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染試劑1：轉(zhuǎn)染效率在貼壁細(xì)胞中可高達(dá)90%以上2：極低的細(xì)胞毒性，轉(zhuǎn)染細(xì)胞死亡率不到10%3：操作簡(jiǎn)便，可用于含血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞的轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染前后不需要更換培養(yǎng)液注意事項(xiàng)1：建議進(jìn)行細(xì)胞密度優(yōu)化實(shí)驗(yàn)2：轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)應(yīng)保持良好，不要有支原體污染3：避免轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備體系中存在血清4：盡量不要使用抗生素5：如果需要穩(wěn)轉(zhuǎn)，請(qǐng)?jiān)谵D(zhuǎn)染24-48h后加入篩選培

如何高效將質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染至293細(xì)胞系2023/08/07: 關(guān)于293細(xì)胞系293細(xì)胞(人胚腎細(xì)胞)系包括AAV293、HEK293、293T293F、293A等細(xì)胞株，是進(jìn)行病毒包裝和重組蛋白表達(dá)最為常用的工程細(xì)胞之一。特別是AAV293細(xì)胞，目前已成為腺相關(guān)病毒(AAV)包裝最為理想的宿主細(xì)胞，而AAV是目前基因治療的主要病毒載體之一；Starvio293細(xì)胞質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染試劑盒1：Starvio293對(duì)293細(xì)胞的轉(zhuǎn)染陽(yáng)性率可高達(dá)95%以上;2：轉(zhuǎn)染后24小時(shí)，細(xì)胞死亡率僅為5%左右。3：Starvio293使用也非常方便，先將轉(zhuǎn)染試劑與質(zhì)粒DNA

siRNA轉(zhuǎn)染操作及要點(diǎn)2023/08/07: 轉(zhuǎn)染試劑儲(chǔ)存轉(zhuǎn)染試劑-20°C避光保存，TransEnhancer于2-8°C存放體外轉(zhuǎn)染操作流程1：細(xì)胞接種:轉(zhuǎn)染前一天接種細(xì)胞，使細(xì)胞在轉(zhuǎn)染時(shí)密度在30-50%2：siRNA-Starvio轉(zhuǎn)染復(fù)合物準(zhǔn)備:Starvio用25ulTransEnhancer稀釋室溫孵育5min將siRNA稀釋液與Starvio稀釋液混合(總體積50ul)將轉(zhuǎn)染復(fù)合物加到培養(yǎng)的細(xì)胞內(nèi)注意事項(xiàng)1:建議對(duì)轉(zhuǎn)染條件進(jìn)行優(yōu)化，特別是第一次使用。例如:24孔培養(yǎng)板，siRNA用量在6、12、18、24、30pmol之間調(diào)

如何提高 RT-PCR 反應(yīng)的靈敏度與特異性2023/06/30: 1.首先確定模板RNA完整性好，無(wú)DNA污染。2.RNA模板中不應(yīng)含有擴(kuò)增反應(yīng)抑制劑。3.為了防止模板降解，在反應(yīng)體系中加入RNase抑制劑RNasin。4.使用適量的模板RNA，模板量太多會(huì)降低特異性，太少會(huì)導(dǎo)致擴(kuò)增不出條帶或條帶太弱。5.若模板中有二級(jí)結(jié)構(gòu)，可通過(guò)提高逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)溫度來(lái)提高擴(kuò)增效果。6.設(shè)計(jì)引物時(shí)，避免在引物3’端含有互補(bǔ)序列，避免形成內(nèi)部發(fā)卡結(jié)構(gòu)。深圳安培生物科技有限公司，是一家具有核心的技術(shù)實(shí)力、壹流的經(jīng)營(yíng)管理水平和完善的市場(chǎng)銷售體系的生物高科技企業(yè)?？偛吭O(shè)在廣東，服務(wù)面向

避免 RNA 降解的方法以及RNA 中含有逆轉(zhuǎn)錄抑制劑時(shí)的處理2023/06/30: 避免RNA降解的方法：1.在用來(lái)驗(yàn)證完整性之前先在變性膠上分析RNA。2．使用良好無(wú)污染技術(shù)分離RNA。3.將組織從動(dòng)物體取出后立刻提取RNA，并將提取好的RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA進(jìn)行低溫保存。RNA中含有逆轉(zhuǎn)錄抑制劑時(shí)的處理:逆轉(zhuǎn)錄抑制劑包括：SDS、EDTA、甘油、焦磷酸鈉、亞精胺和胍鹽，可將對(duì)照RNA同樣品混合，同對(duì)照RNA反應(yīng)比較產(chǎn)量以檢測(cè)RNA抑制劑；若對(duì)照RNA與樣品混合后產(chǎn)量降低，則說(shuō)明樣品中存在逆轉(zhuǎn)錄抑制劑，可用70%（v/v）乙醇對(duì)RNA沉淀進(jìn)行清洗，以除去抑制劑。深圳安培生物科

RT-PCR的靈敏度低2023/06/30: 可能原因1：RNA問(wèn)題（包括：RNA被損害和降解；初始模板RNA不充分）。解決方法：如果全損害或者降解的話，更換RNA；增加模板RNA的濃度；使用10ng-1μg的總RNA?？赡茉?：儀器故障。解決方法：檢查擴(kuò)增儀的溫度；檢查熒光儀器溫度和信號(hào)。如果發(fā)現(xiàn)故障，就趕緊找廠家維修?？赡茉?：PCR擴(kuò)增無(wú)效。解決方法：反轉(zhuǎn)錄的抑制劑很多很多，包括SDS、EDTA、胍鹽、甲酰胺、磷酸鈉和亞精胺等等。一定要注意，不要被這些抑制劑污染了。深圳安培生物科技有限公司，是一家具有核心的技術(shù)實(shí)力、壹流的經(jīng)營(yíng)管理

RT-PCR的非特異信號(hào)2023/06/30: 可能原因1：引物問(wèn)題（包括：引物二聚體太多）。解決方法：檢查引物設(shè)計(jì)環(huán)節(jié)和合成環(huán)節(jié)，必要時(shí)重新設(shè)計(jì)和合成引物?？赡茉?：擴(kuò)增酶問(wèn)題。解決辦法：選擇hotstartTaq酶進(jìn)行擴(kuò)增，可提高靈敏度，增加特異性?？赡茉?：檢測(cè)溫度太低。解決辦法：在更高的溫度下檢測(cè)熒光信號(hào)。這個(gè)時(shí)候，引物二聚體已經(jīng)解鏈。深圳安培生物科技有限公司，是一家具有核心的技術(shù)實(shí)力、壹流的經(jīng)營(yíng)管理水平和完善的市場(chǎng)銷售體系的生物高科技企業(yè)?？偛吭O(shè)在廣東，服務(wù)面向全國(guó)。安培生物集進(jìn)口試劑、實(shí)驗(yàn)室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開(kāi)發(fā)為一體的

RT-PCR的無(wú)擴(kuò)增產(chǎn)物2023/06/30: 可能原因1：引物問(wèn)題（包括：引物設(shè)計(jì)較差，引物合成較差，引物濃度太低）。解決方法：設(shè)計(jì)引物的時(shí)候，避免在引物3'端含有互補(bǔ)序列；避免可以形成內(nèi)部發(fā)卡結(jié)構(gòu)的序列；設(shè)計(jì)Tm類似的引物。針對(duì)引物合成的問(wèn)題，用普通電泳法，看引物的設(shè)計(jì)和合成質(zhì)量，是否有目的條帶出現(xiàn)。最佳引物濃度介于0.1μM到0.5μM之間。可能原因2：探針問(wèn)題。解決辦法：就要用到我們前面提到的序列分析了。用blast對(duì)探針序列進(jìn)行比對(duì)，設(shè)計(jì)符合要求的探針?？赡茉?：模板問(wèn)題（包括：模板質(zhì)量不好，模板濃度太低）。解決方法：提高模板質(zhì)量

消滅 PCR 非特異性擴(kuò)增的方法2023/06/28: 非特異性擴(kuò)增，即進(jìn)行PCR所擴(kuò)增出來(lái)的條帶不是所要的，引物與模板在非目的條帶處有錯(cuò)配，導(dǎo)致延伸產(chǎn)物不是目的條帶。例如引物二聚體，即引物在退火過(guò)程中產(chǎn)生了hairpin結(jié)構(gòu)或其他二級(jí)結(jié)構(gòu)，或者引物在模板的某些位置非特異性地結(jié)合，也同樣會(huì)產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增。PCR產(chǎn)物都是通過(guò)引物延伸產(chǎn)生的。當(dāng)引物產(chǎn)生了二聚體或者非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物之后，引物本身就無(wú)法再延伸形成PCR產(chǎn)物了，這樣的情況下，非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物越是多，那目的產(chǎn)物就越是少。如果在qPCR過(guò)程中，就會(huì)在熔解曲線中形成雙峰。消滅PCR非特異性擴(kuò)增的方

DNA 復(fù)制需要哪些元素2023/06/28: 1)需要脫氧核苷三磷酸：進(jìn)行DNA合成必須具備的2個(gè)關(guān)鍵底物之一，即4種脫氧核苷三磷酸——dGTP、dCTP、dATP、dTTP。通常商品化PCR酶會(huì)提供這4種脫氧核苷三磷酸的混合物dNTP。2)需要引物-模板接頭：DNA合成的第二個(gè)重要底物是一具有特定序列的雙鏈DNA，稱為引物-模板接頭，即指導(dǎo)互補(bǔ)脫氧核苷酸添加的單鏈DNA模板和與模板互補(bǔ)但比模板短的一小段序列。較長(zhǎng)的DNA鏈有一個(gè)與引物退火的區(qū)域和一個(gè)毗鄰的單鏈DNA區(qū)，此區(qū)作為DNA合成的模板；較短的引物與較長(zhǎng)的DNA鏈退火，且必須有與模

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