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細胞培養常見問題及解答（二）2021/12/09

接上一期，本期我們繼續分享細胞培養常見的問題吧~12.附著性細胞繼代時所使用的trypsin-EDTA濃度？應如何處理？一般使用的trypsin-EDTA濃度為0.05%trypsin-0.53mMEDTANa4。第一次開瓶后應立即少量分裝于無菌試管中，保存于-20℃，避免反復冷凍解凍造成trypsin的活性降低，并可減少污染的機會。13.欲將一般動物細胞離心下來，其離心速率應為多少轉速？回收動物細胞，其離心速率一般為300xg(約1000rpm)，5-10分鐘，過高的轉速，將造成細胞死亡。14

細胞培養常見問題及解答（一）2021/12/09

1.如何選用特殊細胞系培養基？培養某一類型細胞沒有固定的培養條件。在MEM中培養的細胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長。總之，首先選MEM做粘附細胞培養、RPMI-1640做懸浮細胞培養是一個好的開始。2.何時須更換培養基？視細胞生長密度而定，或遵照細胞株基本數據上的更換時間，按時更換培養基即可。3.可否使用與原先培養條件不同的培養基？不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應的細胞培養基，若驟然使用和原先提供的培養條件不同的培養基，細胞大都無法立即適應，造成細胞無法存活。4.可否使用與

為什么細胞會抱團？因為天氣冷了？2021/12/09

是否總是遇到細胞抱團的現象？是否總是因為搞不清楚細胞抱團原因而困惑？是否總是因為難以將抱團細胞拯救回來而抓狂？童鞋們，我來拯救你們的細胞了，今天給大家從四個層面剖析細胞抱團的真實原因，快來圍觀吧！一、細胞本身生長特性有抱團傾向有些細胞本身有抱團生長的特性，給大家看五種喜歡抱團的細胞類型：細胞類型①：NCI-H716人結直腸腺癌細胞形態：淋巴母細胞樣生長特性：懸浮生長細胞喜歡在懸浮液中呈葡萄狀聚集，抱團細胞粒粒飽滿細胞類型②：Caco-2人結直腸腺癌細胞形態：上皮樣生長特性：貼壁生長此細胞喜歡貼壁

為什么細胞會不貼壁、生長緩慢？2021/12/08

在細胞培養過程中會出現這樣或那樣的問題，這些問題從細胞生長角度來說，針對細胞不貼壁、生長緩慢、生長不好，甚至死亡的原因，我們做以下分析并提出相對應的解決方法。一、培養細胞不貼壁可能原因：●胰蛋白酶消化過度；●支原體污染；●培養基pH值過堿（NaHCO3分解）；●細胞老化；●接種細胞起始濃度太低或太高。解決方法：●縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度；●分離培養物，檢測支原體。清潔支架或培養箱。如發現支原體污染，丟棄培養物；●使用無菌醋酸溶液調整pH值或充入無菌CO2；●啟用新的保種細胞；●調節

實驗病理學技術—冰凍切片詳解剖析2021/12/08

童鞋們，今天來和大家聊聊實驗病理學方面的技術——冰凍切片。冰凍切片因為不涉及乙醇脫水、二甲苯透明等有機溶劑處理步驟，能較好保存組織內酶、糖及表面抗原的抗原性，是免疫組織化學和免疫熒光的常用切片方法。但是因為其切片厚度（8-10µm）較石蠟切片（3-5µm）厚，所以最后呈現的組織形態往往不如石蠟切片。一般的操作步驟是將新鮮組織取出后，盡快埋入已有OCT（冰凍切片專用膠）的冷凍包埋盒內。然后放入液氮中速凍，之后移入-80攝氏度保存。如果需要馬上切片，需要在冰凍切片機中平衡溫度大概20-30分鐘，再在

細胞凍存的方法和注意事項2021/12/08

實驗室里有細胞未用到時，需要將細胞凍存，那細胞凍存應怎么做呢？和細胞凍存時需要注意哪些問題，本期和大家分享細胞凍存的方法和需注意的事項。1、冷凍培養基為什么要加DMSO？因為細胞在不加任何保護劑的情況下直接凍存時，細胞內外的水分都會很快形成冰晶，冰晶的形成將造成細胞損傷，還可引起細胞的的死亡。目前多采用甘油和DMSO做保護劑。這兩種細胞無明顯毒性，分子量小，溶解度大，易穿透細胞，可以使冰點下降，提高包膜對水的通透性。2、DMSO的等級和無菌過濾的方式為何？冷凍保存使用的DMSO等級，必須為Tis

細胞傳代的方法和注意事項都有哪些？2021/12/08

在細胞傳代時，都應該用哪種方法較為合適？或者在做細胞傳代時都應注意哪些事項呢？怎樣才能做好細胞傳代讓接下的實驗更順呢？帶著這些疑問，本期小編匯總些細胞傳代的經驗分享給大家，希望對大家做細胞傳代時有所幫助。1、細胞傳代的方法都有哪些？根據不同的細胞采取不同的方法。貼壁生長的細胞用消化法傳代；部分貼壁生長的細胞用直接吹打即可傳代；懸浮生長的細胞可以采用直接吹打或離心分離后傳代，或用自然沉降法吸除上清后，再吹打。2、原代培養的第一次傳代應注意的問題？細胞沒有生長到足以覆蓋瓶底壁的大部分表面以前，不要急

如何選擇細胞培養用液和使用注意事項2021/12/08

細胞培養當中，選擇好合適的培養用液和正確使用培養用液都是細胞培養得好的關鍵，本期小編結合過往經驗分享給大家，希望能給大家的細胞培養帶來幫助。1、如何正確選擇培養基種類？引用幾款比較經典的培養基舉例：2、如何選用特殊細胞系培養基？培養某一類型細胞沒有固定的培養條件。在MEM中培養的細胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長。總之，首先選MEM做粘附細胞培養，RPMI-1640做懸浮細胞培養是一個好的開始。3、什么培養基中可以省去加酚紅？酚紅在培養基中被用來作為PH值的指示劑：中性時為紅色，酸

復蘇凍存的細胞常見問題處理方法2021/12/07

本期跟大家分享復蘇凍存細胞時，常見的問題處理方法，希望幫助大家平時在復蘇凍存細胞時減少出錯。1、收到的冷凍管瓶身破裂，瓶蓋有裂紋，或瓶蓋脫落的原因？冷凍管瓶蓋裂紋，或瓶身破裂，可能是因為操作者夾取冷凍管時用力不當，造成冷凍管裂損，建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動或松脫，是因熱脹冷縮的物理現象，冷凍管有可能因此而造成細胞污染，故冷凍管于放入和取出液氮桶時，均應立刻將冷凍管再一次扭緊。2、冷凍管應如何解凍？將冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全，可佩戴防護眼鏡和手套預防冷凍管的爆裂。取出

新買的細胞常見問題的處理方法2021/12/07

細胞是生物學實驗的重要材料，也是生物細胞學實驗的基礎，藥物、基因功能、疾病機理等的相關研究多數需要在細胞水平進行闡釋。本期小編匯總了新買回來或惠贈的細胞遇到常見問題的處理方法，希望能給大家的細胞培養帶來幫助。1、新買的或惠贈的細胞如何處理？不管買的細胞、惠贈的細胞，剛拿到手應趕緊做這幾件事：檢測瓶子是否破裂；培養基是否漏出，是否渾濁；是否有支原體污染；迅速擴增凍存。2、能否使用與原先培養條件不同的培養基？不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應的細胞培養基，若驟然使用和原先提供培養條件不同的培養基

如何做好細胞的污染防治？2021/12/07

細胞培養，受人員操作和環境條件的影響比較大，在細胞培養中常常會遇到很多的細節問題，而每個問題都有可能導致細胞培養的失敗。所以做好細胞的污染防治是能否順利開展細胞實驗的必要措施。1.細菌污染細菌污染是細胞培養中最常見的污染，主要由操作不慎或使用了滅菌不*的耗材與試劑引入。最常見的有枯草桿菌、大腸桿菌、假單胞菌及白色葡萄球菌。鏡下形態則為長桿狀、短桿狀和顆粒狀等。左邊的就是比較典型的桿菌污染，一般桿菌會延軸向快速游動，量少時培養基澄清。右圖是顆粒狀污染，一般培養基會渾濁或有白色沙狀沉淀。好氧菌增殖分

如何做好細胞的培養、傳代、凍存和復蘇？2021/12/07

1.準備工作：根據培養細胞的特性，提前準備好適合的培養基和血清等。最好沿用細胞原來的培養條件，以免細胞在新環境下還需要過渡適應。同時，充分了解到細胞的生長特性和形態特征，便于后續的培養觀察。2.貼壁細胞傳代：1）移棄使用過的細胞培養液。（不要直接倒掉，避免瓶口殘留導致易污染）2）使用不含鈣鎂離子的平衡鹽溶液（PBS）沖洗細胞。從與貼壁細胞層相對的容器一側輕輕加入沖洗液，以避免攪動細胞層，前后搖晃容器數次，最后移棄沖洗液。（洗去殘留的血清，避免影響胰酶的活性。）3）以25cm2的培養瓶為例，向瓶內

細胞培養之細胞系身份要明確2021/12/07

細胞是生物學實驗的重要材料，也是生物細胞學實驗的基礎，藥物、基因功能、疾病機理等的相關研究多數需要在細胞水平進行闡釋。而細胞培養，首先就是要給細胞系明確身份，才能避免踩到用錯細胞株培養的雷區。細胞系身份需明確我們之所以選定某種細胞系開展實驗，是因為所選細胞系的一些特性符合研究方向的設定。比如組織特性，疾病特性，功能特性，基因表達特性等。一旦用錯了細胞株，對我們研究結果的判斷就會帶來很大的誤差和不確定性。而近年來，多個（木又）威機構發現細胞系在培養和流通過程中，出現了很嚴重的交叉污染。據不*統計，

淺談溶解度2021/12/06

一、溶解度的概念溶解度是定溫、定壓時，每單位飽和溶液中所含溶質的量，也就是一種物質能夠被溶解的最大限度或飽和溶液的濃度。溶解度分為固體溶解度和氣體溶解度，本文主要介紹固體溶解度的內容。二、固體物質溶解度的概念固體物質的溶解度是指在一定的溫度下，某物質在100克溶劑里達到飽和狀態時所溶解的質量，用字母s表示，其單位是“g/100g的水”。在未注明的情況下，通常溶解度指的是物質在水里的溶解度。例如：在20℃時，100g的水里最多能溶36g氯化鈉（這時溶液達到飽和狀態），即在20℃時，氯化鈉在水里的溶

大鼠肝星狀細胞培養技術2021/12/06

材料與儀器雄性SD大鼠戊巴（匕匕）妥鈉小牛血清DMEM酶消化液I、ⅡNycodenzD-Hanks’液HBSS臺盼蘭手術器械尼龍網相差顯微鏡熒光顯微鏡步驟一、實驗步驟1.大鼠腹腔麻醉后在超凈臺上剖腹，進行門靜脈插管。2.以D-Hanks‘液灌注，同時剪開下腔靜脈，沖掉血液后，改灌以100ml酶消化液I(0.05%IV型膠原酶)。3.待肝臟變軟后，離體肝臟并剪碎，繼續以酶消化液II(含20U/mlDNaseI的0.05%IV型膠原酶)消化15min，尼龍網過濾后以450g離心5min(4℃，下同)

大鼠胰島細胞培養實驗2021/12/06

材料與儀器一周齡Wistar大鼠D-Hanks’液胰蛋白酶Ⅴ型膠原酶葡萄糖碘乙酸手術剪手術鉗眼科剪刀眼科鑷子大頭針手術刀片培養皿步驟1.一周齡Wistar大鼠，斷頸處死，于75%乙醇浸泡15分鐘，無菌取出胰腺，于冰冷無菌D-Hanks’液中漂洗，用眼科剪仔細清除脂肪、包膜、血管等胰外組織，轉入青霉素小瓶中。2.加入少量無菌D-Hanks’液，用眼科剪剪成0.1-1.0mm3大小的碎片，用滴管輕輕吸出上層細小脂肪碎塊和油滴，再用無菌D-Hanks’液反復清洗8——10次，加入10倍體積無菌消化酶液

大鼠視神經少突膠質細胞培養實驗——牛血清培養法2021/12/06

材料與儀器Wistar大鼠亞（石西）酸鈉腐胺轉鐵蛋白胰島素甲狀腺素黃體酮谷氨酰胺小牛血清兔抗鼠GC抗體眼科剪滴管離心機培養皿CO2培養箱步驟一、實驗步驟1.取新生2d的Wistar大鼠10只，無菌條件下取出雙側視神經。2.接種至24孔培養板內經多聚賴氨酸處理的蓋玻片上。3.加入含30g·L-1小牛血清的DMEM/F12培養基，37℃，50mL/LCO2，100%濕度連續培養3d。4.3d后棄廢液，改為含5g·L-1小牛血清DMEM/F12條件培養液繼續培養。5.每周換液2次。在獲得足夠的細胞數量

細胞培養常遇問題集錦（十二）2021/12/06

今天帶來新一期細胞培養常遇問題匯總，本期除了圖文案例說明之外，還帶了一些視頻案例，供童鞋們參考學習~56、▲問：這個亮晶晶的小點，是霉菌污染嗎？答：這個小亮點，說實話不太好分辨，看周圍還有毛茸茸，極大概率是真菌污染了。57、▲問：培養基沒變色，那個白色的東西特別多，鏡下看倆胞體連著，一個背著另一個的部分身體，這種是什么呢？答：這是真菌污染，真菌污染培基不變色，真菌一般泛白。58、▲問：請問上邊三個圖里的細胞是些什么問題？答：圖里的細胞問題是霉菌污染。問：背景的小點和用橙色勾住的部分都是霉菌污染嗎

大鼠星型膠質細胞培養實驗——胰酶消化法2021/12/05

材料與儀器SD大鼠苯巴（匕匕）妥解剖液胰蛋白酶DnaseDM培養液離心管培養箱手術器材步驟一、取14.5dSD大鼠一只。二、苯巴（匕匕）妥0.5ml腹腔注射，待麻醉后置于手術臺上，酒精棉球消毒皮膚，開腹取出子宮（約12-14個），放入解剖液中，剖開子宮，取出胚胎，放入解剖液中，在耳眼之間離斷，取頭側部組織，去除腦膜組織，取原始中腦區組織，放入離心管裝的解剖液中，待全部取出后，1500轉2分鐘。三、用吸管吸出上清液，在組織細胞沉淀中加入胰蛋白酶一管（1ml/vial），室溫30分鐘，1500轉，離

大鼠星型膠質細胞培養實驗——酶消化法2021/12/05

材料與儀器Wistar大鼠乳鼠FBSDMEM胰蛋白酶EDTA酒精眼科剪滴管離心機培養皿CO2培養箱步驟一、實驗步驟1.新生1-2天Wistar大鼠乳鼠，經75%酒精消毒，斷頭處死。2.取腦放入冷的D-Hanks'平衡鹽溶液，去除腦膜及大血管。3.分離兩側大腦皮質并剪成1mm3大小，加入0.25%胰蛋白酶37℃空氣浴震蕩消化10min。4.用含10%FBS的DMEM培養基終止消化，離心(1000rpm，10min)，去上清。5.用含10%FBS的DMEM培養基重懸沉淀，經75μm篩網過濾，收集濾液