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大鼠大腦皮層神經(jīng)元細胞培養(yǎng)實驗——酶消化法2021/12/05

材料與儀器小鼠酒精解剖液胰蛋白酶DMEMF12B27阿糖胞苷培養(yǎng)液培養(yǎng)箱步驟一、小鼠大腦皮層神經(jīng)元原代培養(yǎng)步驟1.于無菌條件下切取鼠頭并以75%酒精浸泡1min，解剖出完整鼠腦。2.預(yù)冷解剖液中分離去除軟膜、血管、取大腦皮質(zhì)漂洗，用眼科剪將皮質(zhì)反復(fù)剪切成碎塊。3.移入培養(yǎng)皿中，吸除解剖液加入0.25%胰蛋白酶2ml，37℃培養(yǎng)箱中消化30min。4.將皮層組織碎塊移入離心管，棄去剩余消化液，用接種液洗3次，每次洗滌后使組織塊充分沉降到試管底，棄去上清液。5.最后再用接種液1ml混懸，反復(fù)吹打（巴

大鼠大腦皮層神經(jīng)元細胞培養(yǎng)實驗——機械性劃割培養(yǎng)2021/12/05

材料與儀器SD大鼠硼酸硼砂緩沖液胰酶-EDTA消化液D-Hanks’眼科剪滴管離心機培養(yǎng)皿CO2培養(yǎng)箱步驟一、實驗步驟1.孕16dSD大鼠經(jīng)戊巴（匕匕）妥鈉麻醉后，碘酒、75%乙醇消毒腹部皮膚，依次剪開皮膚、肌肉、皮下筋膜，無菌操作下取出胚胎放入預(yù)冷的D-Hanks’平衡鹽液中。2.在解剖顯微鏡下分離并取出胚胎大腦皮層，除去腦膜，剪碎組織成約1mm3大小，加入胰酶-EDTA消化液并放入37℃孵箱內(nèi)消化20min，中間搖晃一次。3.隨后用滴管吸出組織轉(zhuǎn)移到裝有預(yù)冷的培養(yǎng)液(DMEM＋10%FBS)

大鼠乳鼠成骨細胞培養(yǎng)實驗——酶消化法2021/12/05

材料與儀器SD大鼠F12*培養(yǎng)液胰蛋白酶Ⅱ型膠原酶酒精手術(shù)器械磁力攪拌器步驟一、實驗步驟1.拉頸處死24小時內(nèi)新生的SD大鼠，75%乙醇浸泡5min，取出頭蓋骨，分離頂骨和額骨，冰生理鹽水液反復(fù)洗滌大鼠乳鼠顱蓋骨標(biāo)本除去脂肪組織及殘留血，放入另一盛有F12*培基液的培養(yǎng)皿中再洗滌，將顱骨剪成2～5mm2碎片，將洗滌過的骨碎片用0.25%胰蛋白酶2ml預(yù)消化15min，以清除纖維組織細胞，棄去上清液(其中主要含成纖維細胞)。2.然后以0.1%Ⅱ型膠原酶10ml，在37℃環(huán)境中消化20分鐘，室溫下磁

大鼠主動脈平滑肌細胞培養(yǎng)實驗——貼塊法2021/12/04

材料與儀器SD大鼠PBSFBSDMEM手術(shù)剪手術(shù)鉗眼科剪刀眼科鑷子大頭針手術(shù)刀培養(yǎng)皿步驟一、實驗步驟1.SD大鼠(150-200g)，斷頭，浸入75%的酒精中15min。2.置入超凈臺中，將大鼠固定于殺鼠板上，在無菌條件下打開腹腔，分離出胸主動脈、腹主動脈，摘出。3.PBS清洗3遍，剝?nèi)ネ饽ぃ檬中g(shù)刀片刮去內(nèi)膜，留下中膜并將其移入1mL的培基中、剪成1x1mm2大小組織塊。4.再將PBS清洗組織塊，移入25mL的培養(yǎng)瓶中，用尖嘴彎管均勻貼好組織塊，放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱倒置培養(yǎng)6小時后，

大鼠主動脈內(nèi)皮細胞培養(yǎng)實驗——貼塊法2021/12/04

材料與儀器雄性Wistar大鼠DMEM胎牛血清內(nèi)皮細胞生長因子肝素鈉青鏈霉素明膠胰蛋白酶PBSD-Hanks’液手術(shù)器械眼科剪眼科鑷培養(yǎng)皿手術(shù)刀培養(yǎng)瓶CO2培養(yǎng)箱步驟1.頸椎脫臼處死大鼠，將整個大鼠浸泡于75%乙醇中消毒約1min。在無菌狀態(tài)下，逐層剪開胸腔，分離取出主動脈，放含無菌D-Hanks’液培養(yǎng)皿中。2.用眼科剪、鑷盡量去除血管外膜的脂肪和纖維組織。然后，用含抗生素的D-Hanks’液沖洗血管的外表面及血管腔內(nèi)的凝血數(shù)次，再放入另一無菌培養(yǎng)皿中。3.用眼科剪縱向剪開血管，平展在培養(yǎng)皿中

大鼠腦微血管內(nèi)皮細胞原代培養(yǎng)實驗——酶消化法2021/12/04

材料與儀器SD大鼠纖連蛋白Ⅳ型膠原明膠肝素鈉堿性成纖維細胞生長因子青霉素鏈霉素NaHCO3牛血清白蛋白鼠尾膠葡聚糖DNA酶ID-Hanks'液II型膠原酶低溫離心機離心管移液槍步驟一、實驗材料準備1.實驗動物每次實驗采用10只2-3周齡SD大鼠，雌雄均可，體重40~60g。2.試劑纖連蛋白(fibronectin)、Ⅳ型膠原、鼠尾膠、葡聚糖(dextran，分子量100~200kDa)和DNA酶I(DNaseI)購自Sigma公司；D-Hanks'液、10xPBS按配方自制；II型膠原酶購自Wo

大鼠肝星狀細胞原代培養(yǎng)實驗——胰酶消化法2021/12/04

材料與儀器SD大鼠戊巴（匕匕）妥鈉小牛血清DMEM酶消化液D-Hanks'液酚紅臺盼蘭HBSS氯化鈉PBS手術(shù)刀手術(shù)剪尼龍網(wǎng)相差顯微鏡熒光顯微鏡步驟一、實驗材料準備1.動物：雄性SD大鼠(體重250-450g)。2.試劑：戊巴（匕匕）妥鈉，小牛血清(或胎牛血清，則更好)，DMEM，酶消化液I、Ⅱ(以HBSS配)，18%Nycodenz(以GBSS配)，D-Hanks'液(KCl0.4g/L，KH2PO40.06g/L，NaCl8.0g/L，NaHCO30.35g/L，Na2HPO4·7H2O0.

大鼠肺成纖維細胞原代培養(yǎng)實驗——胰酶消化法2021/12/04

材料與儀器Wistar乳鼠PBS牛血清青霉素鏈霉素EDTA胰酶碘酒酒精綿球科直剪眼科彎剪眼科直鑷眼科彎鑷玻璃平皿塑料培養(yǎng)瓶步驟一、實驗材料準備1.動物出生后1-4天的Wistar乳鼠1只。2.試劑PBS、培養(yǎng)液(Hyclone的低糖DMEM，含Hyclone的10%新生牛血清、100U/ml青鏈霉素、1%明膠PBS、0.25%胰酶(含EDTA，GIBCO)，碘酒和酒精綿球。3.器械眼科直剪2把、眼科彎剪2把、眼科直鑷2把、眼科彎鑷2把、玻璃平皿3套，25cm2塑料培養(yǎng)瓶(Costar)。二、具體

細胞培養(yǎng)常遇問題集錦（十一）2021/12/03

今天為大家?guī)硇乱黄诩毎囵B(yǎng)常遇問題集錦，小編一直會不斷為大家整理相關(guān)的問題，助力大家科研中少走彎路，同時也歡迎大家咨詢相關(guān)產(chǎn)品，安培生物提供正品的生物試劑耗材，避免童鞋們在外踩坑。話不多說，為大家上今天的正片！51、問：有全骨髓貼壁的方法嗎？答：全骨髓的用的梯度離心。52、問：請問一下有什么污染是加入細胞后幾分鐘內(nèi)就能發(fā)生的嗎？答：一般不行，大腸桿菌繁殖很快，還需要20分鐘才能分裂一次。53、▲問：養(yǎng)的是HK-2細胞，大前天下午進行的1傳2，但今天去看細胞，發(fā)現(xiàn)長的很稀疏，而且感覺這個形態(tài)是不

收到活細胞怎么辦？2021/12/03

收到細胞后，發(fā)現(xiàn)是培養(yǎng)瓶，第一次操作的束手無策，怎么辦？首先我們得弄明白我們得細胞是貼壁細胞還是懸浮細胞或者是半懸浮細胞,不明白的同學(xué)可以參考下圖哦：半懸浮半貼壁:BV-2細胞貼壁細胞：HCMEC/D3懸浮細胞：THP-1貼壁細胞請遵守以下準則：細胞收到后，顯微鏡下觀察，有些細胞貼壁比較牢，它不會因為運輸問題有變化，收到后下顯微鏡下觀察細胞的密度，確定無污染，細胞無異常先放培養(yǎng)箱穩(wěn)定1-2個小時后，按照貼壁細胞消化順序消化：一貼壁細胞消化順序如下：1.準備工作，胰酶、培養(yǎng)基、PBS各預(yù)熱10-1

細胞培養(yǎng)常遇問題集錦（十）2021/12/03

今天為大家?guī)砑毎囵B(yǎng)常遇問題的第十期，看看本期都為大家分享常遇的都有哪類型的問題，小編已為各位客官整理出來了~~來，上正片！46、▲問：昨天剛剛復(fù)蘇的細胞，今天出現(xiàn)這個情況，會是什么問題呢？那是不是因為凍存的時候就污染了呢？答：一片兒一片兒的，黑云彩一樣的，是霉菌污染。也有可能。47、▲問：培養(yǎng)液是清亮的，高背景下看細胞也沒有異常，請問這是霉菌嗎？答：這個東西很常見，有可能是血清蛋白沉淀或培養(yǎng)耗材里的雜質(zhì)。48、▲問：以上三圖霉菌污染怎么處理么呢？三抗一直在用沒有效果。而且會長的越來越多。代數(shù)

細胞培養(yǎng)常遇問題集錦（九）2021/12/03

細胞培養(yǎng)常遇問題集錦第九期如期而至，看下本期為大家所整理的細胞培養(yǎng)常遇問題，幫大家解決遇到的問題~接下來，上正片~41、▲問：這個是原代臍帶貼壁培養(yǎng)后，出現(xiàn)的，這個小圓點是啥？是的，培養(yǎng)MSC。這個造血細胞，換個液就沒了吧？答：是要提msc對吧？小圓點可能是造血細胞。對，換了就沒了。42、問：骨髓來源間質(zhì)充干細胞提取是否很容易？沖老鼠腿就有了是嗎？離心一下，就好了？看提BMSCs的很多博士論文都直接用培養(yǎng)基沖，然后離心。答：骨髓提取的是造血干細胞，骨髓雖然可以分離出間充質(zhì)干細胞，但是主要還是以提

如何養(yǎng)好SH-SY5Y細胞？2021/12/03

SH-SY5Y細胞于1970年構(gòu)建，是骨瘤轉(zhuǎn)移灶的神經(jīng)母細胞瘤SK-N-SH細胞系經(jīng)3次克隆后得到的亞系(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y)。如今，SH-SY5Y細胞已經(jīng)是科學(xué)研究中較為常用的細胞系之一了。但很多人在養(yǎng)SH-SY5Y細胞的過程中，總會遇到各種問題。今天，小編來為大家一一解答。SH-SY5Y細胞基本信息細胞名稱SH-SY5Y(人神經(jīng)母細胞瘤細胞)細胞別稱SHSY5Y;SHSY-5Y;SH-Sy5y;SK-SH-SY5Y;SY5Y種屬及來源人（女性，4歲）腦神

細胞培養(yǎng)常遇問題集錦（八）2021/12/02

本期同樣收集了一些案例，和大家分享，希望大家在科研路上可以少走彎路。36、▲問：細胞之間的，到底是細胞碎片還是污染？加雙抗了。答：確定是污染，極大概率是細菌污染，加雙抗有可能有抗性了。基礎(chǔ)培養(yǎng)基是不含雙抗的，因為雙抗4度下長期儲存會降低活性。37、問：做脂肪來源間充質(zhì)干細胞，要怎么提取？答：可以使用原代干細胞分離液進行提取。38、▲問：這個背景臟兮兮的，怎么處理，生長還好，用的高糖DMEML929答：這個細胞看起來不夠飽滿，也不透亮，形態(tài)不規(guī)則，棱角不分明，狀態(tài)不算好，是不是營養(yǎng)體系有的東西換了

細胞培養(yǎng)常遇問題集錦（七）2021/12/02

在細胞培養(yǎng)上，總會遇到各類問題，小編會一直將平時接觸到的，匯總到一起幫助大家更好地做好科研，現(xiàn)就為大家更新第七期，細胞培養(yǎng)常遇問題集錦。31、問：請問有腥味成膜的污染是細菌還是真菌？答：腥味成膜是細菌污染，太嚴重了，只能用細菌真菌殺除劑殺殺看。32、▲問：這些點點是啥？剛復(fù)蘇的細胞，這些點感覺不動的，想請教一下，這個細胞是不是污染了？答：這些點應(yīng)該是真菌污染。33、▲問：caco2細胞中間這些點是什么呀？四天了，看著培養(yǎng)基還很清，那加三抗的話能救過來嗎？答：這個像霉菌。霉菌不會混濁，只能試試，污

RAW264.7細胞太容易分化，到底怎樣才能養(yǎng)好它？2021/12/02

養(yǎng)好RAW264.7之基礎(chǔ)篇養(yǎng)好RAW264.7的第一步，是要對它的基礎(chǔ)培養(yǎng)條件了如指掌，比如生長特性、細胞形態(tài)、所需的培養(yǎng)基，甚至培養(yǎng)環(huán)境、傳代比例等等，做到知己知彼，才能百戰(zhàn)百勝。細胞名稱RAW264.7(小鼠單核巨噬細胞白血病細胞)細胞別稱RAW264;RAW2647;RAW264.7;RAW-264.7;Raw264.7;RAW264.7種屬小鼠（雄性，成年BALB/c鼠）組織來源Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤生長特性貼壁細胞細胞形態(tài)不規(guī)則形（圓形、短梭形）生長培養(yǎng)基DMEM＋1

THP-1細胞培養(yǎng)秘籍給有需要的您2021/12/02

THP-1細胞系是1980年Tsuchiya等人建立的人單核細胞白血病細胞系。它來自一位急性單核細胞白血病患者的血液，有分化為多種巨噬細胞的能力，是各領(lǐng)域研究常用的細胞系之一。THP-1細胞基本信息細胞名稱THP-1(人單核細胞白血病)細胞別稱THP1;THP1;THPI;THP-1;TohokuHospitalPediatrics-1種屬人組織來源急性單核細胞白血病，單核細胞生長特性懸浮細胞細胞形態(tài)單核細胞生長培養(yǎng)基RPMI-1640＋10%FBS＋0.05mMβ-mercaptoethano

細胞凍存與復(fù)蘇的正確操作方法2021/12/02

細胞凍存與復(fù)蘇，是細胞培養(yǎng)過程中的常見工作。細胞凍存，是指將細胞貯存在超低溫環(huán)境中，使細胞暫時“冬眠”的技術(shù)，在需要的時候再進行復(fù)蘇。細胞復(fù)蘇，是把凍存在-80℃冰箱或液氮中的細胞快速解凍，并使細胞重新恢復(fù)生長的技術(shù)。本文將為大家介紹細胞凍存與復(fù)蘇的技術(shù)要點和操作步驟。細胞凍存篇凍存原則凍存原則為“慢凍”，即讓細胞在緩慢降溫的條件下逐漸冷凍。如果直接將細胞懸液放在超低溫下快速冷凍，細胞會受到冷凍損傷而死亡。在凍存液中添加的保護劑（如DMSO、甘油）和在凍存盒中添加的異丙醇，都起到程序性降溫的作用

如何選擇流式細胞術(shù)常用的熒光素？2021/12/01

流式細胞儀測定常用的熒光染料有很多種，我們?nèi)绾蝸磉x擇流式細胞儀測定的常用熒光染料呢？以下簡單介紹了熒光素選擇的幾個原則。1.抗原的密度①高表達的抗原可選擇幾乎所有的熒光素；②低密度表達的抗原需要可提供較高S/N比值的熒光素如PE/APC。2.自發(fā)熒光①每種細胞群都有不同水平的自發(fā)熒光；②所有的熒光通道均可觀察到自發(fā)熒光，但自發(fā)熒光強度在波長較長時迅速降低；③對自發(fā)熒光較強的細胞，選擇發(fā)射波長較長的熒光素（如APC）可得到較好的S/N比值；④對自發(fā)熒光比較弱的細胞，發(fā)射波長較長的熒光素對S/N提高

流式細胞術(shù)中如何辨別死細胞？2021/12/01

流式樣品中不可能*去除死細胞，而在流式分析時又不希望有死細胞的干擾，所以如何在流式分析和流式分選時明確分辨死細胞就成為流式細胞術(shù)的一個重要研究內(nèi)容。目前，有四種方法供流式分析者區(qū)分死細胞和活細胞。（1）對角線死細胞活細胞能產(chǎn)生非特異性熒光，只是非特異性熒光信號相對于熒光素發(fā)射的熒光信號較弱。死細胞也可以產(chǎn)生非特異性熒光，而且死細胞產(chǎn)生的非特異性熒光要明顯強于活細胞，有的甚至強于熒光素產(chǎn)生的熒光信號。非特異性熒光產(chǎn)生的熒光波長沒有選擇性，并不是局限于某一熒光波長范圍，而是處于連續(xù)的波長范圍，所以一