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深圳市安培生物科技有限公司
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酵母和細菌蛋白質的代謝放射標記的方法2021/11/08
材料與儀器細胞基本培養基實驗步驟1.接種細胞于只含有必需氨基酸和輔因子的已知成分的基本培養基,于合適溫度中度振蕩培養過夜。2.用新鮮的基本培養基稀釋培養物,繼續溫育至107細胞/ml(酵母)或對數期中期(細菌)。3.5000g室溫離心10分鐘收集細胞,用無硫酸鹽基本培養基重懸至107細胞/ml(酵母)或5X108細胞/ml(細菌)。4.加H235SO4至終濃度20μCi/ml。于適宜溫度輕度振蕩培養1小時(酵母)或20分鐘(細菌)。5.5000g室溫離心10分鐘收集細胞,吸出培養基,倒入放射性廢
用[35S]蛋氨酸和[35S]半胱氨酸標記哺乳動物細胞的方法2021/11/08
材料與儀器細胞培養基實驗步驟1.制備活躍生長著的細胞。從單層培養細胞(約鋪滿75%表面積)中吸去培養基。用預熱至37℃的無血清培養基沖洗兩次(培養基中應該不含蛋氨酸和半胱氨酸)。對于懸浮培養細胞,通過400g離心5分鐘收集細胞。用頂熱至37℃的無蛋氨酸培養基重懸沉淀,400g離心5分鐘。盡可能地去掉上清,用無蛋氨酸培養基重懸細胞至107細胞/ml后轉移至一塊小培養板。2.加入預熱的無蛋氨酸和半胱氨酸的培養基,于37℃培養20分鐘,以耗盡胞內含硫氨基酸庫。3.吸去培養基,立刻換上預熱的、無蛋氨酸和
成纖維細胞飼養層實驗步驟2021/11/05
材料與儀器鏈酶蛋白酶E用D-PBSA配制1%胰蛋白酶和1mmolLEDTA受精后8h的胚胎FBSLDF基礎培養液LDF原代培養液LDF維持培養液D培養液Holtfreter緩沖液培養瓶實驗步驟鱒魚胚胎提取物:(a)收集胚胎(受精后28天的ShastaRainbow或其他鱒魚種系,在10°C條件下飼養,或者受精后3天的斑馬魚,在28°C條件下飼養),在-80°C條件下凍存(b)為了制備提取物,將約150g胚胎融化后,采用Tissuemizer勻漿器(Tekmar)用10mlLDF在冰上勻漿2min
玻璃器皿的準備和滅菌步驟2021/11/05
材料與儀器消毒劑(次氯酸鹽)清潔劑浸泡池試管刷不銹鋼籃子鋁箔無菌指示器無菌指示膠帶或塞滅菌烤箱實驗步驟一、玻璃器皿的收集和清洗1.玻璃器皿用后要立即將其收集到含有消毒劑(次氯酸鹽,用清潔劑稀釋,最少應含有300μg/g的氯,如常規用的次氯酸鈉)的清潔劑(如,7×或Decon)中。在浸泡或清洗前絕不能讓玻璃器皿變干,否則會非常難清洗。2.在清潔劑中浸泡過夜。3.漂洗:(a)次日早,用試管刷手工刷洗或機器刷洗玻璃器皿,自來水沖洗4次后用去離子水沖洗3次。保持水流噴射非常有必要,否則每次都要將瓶子裝滿
報告基因:β-半乳糖苷酶的原位染色實驗方法2021/11/05
材料與儀器β-gal表達質粒轉染細胞D-PBSA染色液6孔培養板恒溫箱倒置顯微鏡實驗步驟一、材料非消毒物品1.D-PBSA2.底物:X-gal(nvitrogen),以二甲基甲酰胺配成20mg/mL,用多聚丙烯管-20℃避光保存,最長可達6個月3.固定液:1.8%的甲醛和0.05%戊二醛,均以PBSA液配制;將85mL水、10mL的10xD-PBSA、5mL福爾馬林(37%甲醛溶液)及0.2mL戊二醛(25%溶液)混合,制備成固定液,于4℃儲存4.染色液:含5mmol/L鐵氰鉀,5mmol/L亞
表皮角質形成細胞模型構建實驗方法2021/11/05
材料與儀器皮膚組織熱解素胰蛋白酶SKDM角質形成細胞生長培養液D-PBSAEDTA分析級甘油dispase低溫保存管尼龍網離心管細胞過濾器手術刀彎鑷實驗步驟一、材料無菌實驗前3天制備飼養層(見方案23.4)。照射3T3細胞(30Gy)和人成纖維細胞(70Gy),最好用含較多細胞的懸液FAD:Wu等[1982]研制的一種用于飼養層培養的高鈣培養液,含有Ham'sF12、DMEM和添加物。HamF12和DMEM混合培養液(1:3)添加1.8Xl0-4mol/L腺嘌呤、10-10mol/L霍亂毒素、1
白細胞分類計數實驗步驟2021/11/05
材料與儀器推玻片一塊干凈玻片數塊消毒的針頭75%酒精棉球蠟筆擦鏡紙顯微鏡瑞氏染液蒸餾水顯微鏡油二甲苯實驗步驟一、血涂片制作1.以75%酒精棉球消毒指頭,用消毒的針頭刺進局部,先拭去第一滴血,然后取血一小滴(米粒大?。┲糜诟蓛舨F系囊欢恕?.用干凈推玻片的一端放在血滴前方,將推玻片略向后移,使與血滴相接觸,讓血滴在推片與載玻片的夾角間平均散開后,用30-45度角不加壓力,平穩地推至另一端制成均勻的血膜薄片(見圖41)。3.血片涼干后,滴上瑞氏染液,使蓋滿整個血膜片,大約半分鐘后再加一倍蒸餾水,輕
學會這6步,輕松搞定transwell實驗2021/11/02
做腫瘤研究的人,很少有不知道transwell實驗的,它是用來研究腫瘤細胞的遷移侵襲轉移情況的一種簡便快捷的實驗方法,還可以構建兩種細胞的共培養體系以及趨化性試驗。今天咱們就來講講怎么做腫瘤細胞的侵襲轉移實驗。Transwell侵襲實驗,其實原理簡單地說,就是用一層膜將高營養的培養液和低營養的培養液隔開,細胞放在低營養的培養液里,為了找吃的,細胞會往高營養的培養液里面跑,但是有膜擋著,所以要穿過膜才行。我們在膜上涂上一層基質膠,模仿細胞外基質,于是細胞就要分泌金屬蛋白酶將基質消化了才可以從低營養
做好流式太難?可能方法就用錯了,解決思路看這里!2021/11/02
流式細胞術(FCM)是利用流式細胞儀對單個細胞或者生物微顆粒的生物學性質進行分析的檢測方式。其特點是能夠快速、精準的分析單個細胞的多種特性,適用于定性、定量分析細胞膜、細胞質和細胞核中的各種細胞成分,還可以研究細胞的各種功能狀態等,特別適用于大量樣品的檢測?,F已被廣泛用于免疫學、細胞生物學、血液學、腫瘤學、微生物學等多個領域。典型的應用實例包括血液系統疾病的免疫分型,腫瘤學中細胞DNA的倍體和周期分析,細胞生物學研究中的細胞凋亡、增殖,細胞表面或胞內的抗原檢測等。其中,流式技術較為廣泛的應用是使
臨床M2巨噬細胞相關基因輔助治療胰腺導管腺癌2021/11/02
胰腺導管腺癌(PDAC)是全球七大癌癥相關死亡原因,也是最常見的人類惡性腫瘤之一。根據2018年全球癌癥統計,大約有45.9萬名新確診患者和近43.2萬人死亡患者。由于早期準確診斷和腫瘤快速進展等困難,大量PDAC(胰腺導管腺癌)病例在診斷時出現臨床晚期或遠處轉移。因此,開發新的、可靠的預后評估和療效預測指標以進一步推進針對性治療具有十分重要的意義。越來越多的證據支持浸潤M2巨噬細胞在胰腺導管腺癌(PDAC)的腫瘤進展中起關鍵作用。然而,對M2巨噬細胞浸潤和中樞基因(FAM53B)在臨床結局和免
抗生素突破性進展!科學家終于弄清楚青霉素如何殺死細菌!2021/11/02
我們現在所熟知的青霉素是人類發現的第一種抗生素。它的問世結束了以細菌為主導致大規模傳染病的肆虐時代,拯救了上千萬被病痛折磨的人。那么青霉素又是怎么被發現的呢?青霉素的發現這就要提到英國的亞歷山大·弗萊明。第一次世界大戰期間,弗萊明是醫療隊的隊長。當時很多士兵由于戰爭受傷感染而死亡。雖然,在治療過程中已經使用消毒水對傷口簡單的消毒,但是消毒水的作用是廣譜的,在殺死有害的細菌時,人體內有用的細菌也被殺死了。亞歷山大·弗萊明于是,在之后的十幾年里弗萊明一直想找到一個更有效的殺菌方法。1927年,一篇關
細胞培養試劑這樣用 ,你都對了嗎?2021/11/02
01為什么要在溶解的一周內使用貯存在4℃冰箱中的液體胰蛋白酶溶液?答:胰蛋白酶在4℃就可能開始降解,如果在室溫下放置超過30分鐘,就會變得不穩定,但是胰酶在消化細胞前必須要預熱,否則容易出現酶活力不夠,也會導致細胞消化不下來,所以為了更好的培養細胞,在細胞培養不多的時候可以分裝使用,這樣就不會出現上面的兩種情況了,還有就是配制胰酶的時候一定要注意降低熱源哦。02培養細胞生長減慢的原因有哪些?其解決辦法有哪些?答:可能得原因有:更換了不同的培養液或血清;培養液中一些細胞生長必需成分如谷氨酰胺或生長
白細胞計數實驗2021/11/01
實驗步驟1.用血紅蛋白吸管吸血20mm3刻度處,拭去管尖血污漬。2.將管內血液放入盛有白細胞稀釋液的小試管內,洗滌數次,立即搖勻。3.稍候,取一小滴懸液,放入血細胞計數池內,靜置1-2分鐘。4.用低倍鏡計數,計算四角四個大方格中的白細胞總數。計算白細胞數/L=4個大方格內白細胞總數÷4×20×106?即:4個大方格內白細胞總數×50×106=白細胞總數/L式中:÷4為每個大方格(即0.1ul)內白細胞平均數,×101個大方格容積為0.1ul,換算成1ul;×20血液稀釋倍數,×106由1ul換算
變移上皮形態學觀察實驗2021/11/01
實驗步驟1.染色:HE2.肉眼觀察:標本是收縮狀態的膀胱,著紫藍色的一側是膀胱腔面的變移上皮。3.低倍鏡觀察:變移上皮由多層細胞構成,各層細胞形態不一。上皮游離面與基底面基本平行,基膜不明顯。4.高倍鏡觀察:從深面向淺層觀察各層細胞的形態。(1)基底層:為一層矮柱狀細胞。(2)中層細胞:位于基底層之上,有數層不規則的多邊形細胞。(3)表層細胞:位于上皮表面,為一層長方形或立方形細胞,細胞大,有時細胞內有兩個核??拷砻娴募毎|染成深紅色。
補體介導的細胞毒試驗2021/11/01
材料與儀器小鼠Hank's液抗小鼠Thy-1的單克隆抗體補體伊紅-Y染液解剖器械平皿不銹鋼網試管吸量管尖吸管載玻片蓋玻片實驗步驟1.小鼠胸腺細胞懸液的制備將4~6周齡小鼠采用頸椎脫臼法處死,取出胸腺放入已加入約4ml冷Hank's液的平皿中,在100目的不銹鋼網上研磨后,過篩,放入試管,離心1000rpm,5分鐘,用Hank’s液洗兩次。將沉淀的細胞重懸于Hank's液中,配成1×107/ml細胞懸液。2.取試管3支,標明順序,依據下表依次加入1×107/ml胸腺細胞懸液、抗小鼠Thy-1的單克
補體介導法細胞毒實驗2021/11/01
材料與儀器C57BL/6J小鼠Hank’s液單克隆抗體補體伊紅-Y染液眼科剪眼科鑷平皿不銹鋼網試管吸量管尖吸管載玻片蓋玻片顯微鏡實驗步驟一、實驗方法1.小鼠胸腺細胞懸液的制備:將4~6周齡小鼠采用頸椎脫臼法處死,取出胸腺放入已加入約4ml冷Hank’s液的平皿中,在100目的不銹鋼網上研磨后,過篩,放入試管,離心1000rpm,5分鐘,用Hank’s液洗兩次。將沉淀的細胞重懸于Hank’s液中,配成1×107/ml細胞懸液。2.取試管3支,標明順序
AO染色法(丫啶橙染色法)檢測細胞凋亡2021/11/01
材料與儀器【試劑】pH4.8~6.0Tritionx-100的PBS緩沖液,AO染料:將AO染料溶于含1%TritionX-100的PBS中,終濃度為6μg/ml,含Rnase100μg/ml,避光保存?!緝x器】熒光顯微鏡實驗步驟制備活細胞懸液106/ml;取95μl細胞懸液,加5μl的AO染液混合、避光作用10min;加入5mlPBS,1500r/min離心5min,棄上清,重復洗滌2次;重懸細胞,吸一滴滴于玻片上并用蓋玻片封片;要點在熒光顯微鏡下,選用515nm激發光鏡檢:AO染色細胞DNA
氨甲喋呤抗性和DHFR擴增實驗方法2021/10/29
材料與儀器中國倉鼠細胞或生長快的人或小鼠細胞系氨甲蝶呤鈉鹽0.15molLNaCl組織培養瓶吸管不含胸苷和次黃(口票)呤的培養瓶倒置顯微鏡液氮罐實驗步驟1.克隆培養親代細胞形成生長旺盛、基因型一致的細胞群體,用于篩選。2.用無菌NaCl0.15mol/L(0.85%)稀釋MTX,臨床使用的包裝是濃度為2.5mg/ml的溶液。3.在幾個相同的培養瓶中分別種2.5×105個細胞,每個培養瓶中加入不含MTX或含0.01μg/ml、0.02μg/ml、0.05μg/ml和0.1μg/mlMTX的*培養基
貼壁細胞培養2021/10/29
材料與儀器凍存細胞70%乙醇PBS胰酶/EDTA25cm2和150cm2組織培養瓶CO2培養箱實驗步驟1.將含有凍存細胞的安瓿放入37℃水浴中解凍。2.用70%乙醇對安瓿的頂端進行消毒,打開安瓿,用吸管將細胞轉移到含有5ml起始培養基的25cm2組織培養瓶中,輕輕搖動培養瓶,使細胞均勻分布于培養瓶中,將其放入5%CO2加濕培養箱中37℃培養過夜。3.吸出起始培養基,換成適當的維持培養基。將細胞放回CO2培養箱37℃培養,每天檢查細胞是否生長至匯片。4.如果細胞生長至匯片,吸出培養基。5.用PBS
懸浮細胞培養2021/10/29
材料與儀器凍存HeLaS3細胞70%乙醇*MEM-10胰酶/EDTA旋轉瓶*培養基-525cm2組織培養瓶C02培養箱SorvallH-6000A轉子100ml或200ml通氣旋轉瓶和帶濾膜的瓶蓋實驗步驟1.將含有凍存HeLaS3細胞的安瓿放入37℃水浴中解凍。2.用70%乙醇對安瓿的頂端進行消毒,打開安瓿,用吸管將細胞轉移到含有5ml*MEM-10培養基的25cm2組織培養瓶中,輕輕搖動培養瓶,使細胞均勻分布于培養瓶中,放入5%CO2加濕培養箱中37℃培養過夜。3.將培養基吸出,用0.5ml3
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