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Cube Biotech瓊脂糖基質的選擇2022/07/28

瓊脂糖由瓊脂二糖的重復單元組成，瓊脂糖珠通常是交聯多孔的，因此蛋白質可以流過珠子的孔隙。瓊脂糖珠粒可用于分子排阻或親和層析，對于親和層析，配體（如NTA或IDA）與瓊脂糖珠聚合物共價連接，可以將帶標簽的蛋白與其他蛋白分離。瓊脂糖基質用于蛋白質的純化已有幾十年的歷史，市售的基于瓊脂糖的基質種類繁多，不同基質之間的物理性質可能大不相同，我們這篇簡短的總結將幫助您找到*佳的產品。Superflow，Sepharose，Agarose的區別AgarosePureCube瓊脂糖交聯度高且在高壓下穩定，可與

冷凍電鏡結合Nanodisc在膜蛋白研究的應用2022/07/28

細胞生物膜所含的蛋白稱為膜蛋白，其參與和行使了眾多細胞功能，包括細胞與外界進行物質運輸、信息傳遞、能量交換等。膜蛋白擔任了各種神經信號分子、激素和其他底物的受體，構成了各種離子跨膜的通道，以及構成各類轉運蛋白。在人體蛋白中，有大約30%是膜蛋白。FDA批準的新藥中，大多數都以膜蛋白為靶點。隨著對膜蛋白工作機理的深入研究，新的細胞調控作用靶點不斷被發現，從而使作用于靶點的新藥能更有針對性地被開發出。例如現在市面上有不少基于細胞轉運通道蛋白設計的藥物，常見的一類抗高血壓藥（如氨氯地平），其主要功能是

如何利用GST標簽蛋白純化蛋白（下）2022/07/28

如何在質粒中添加/克隆GST標簽將GST標簽添加到目標蛋白的優先方法是使用pGEX系列載體，它們有不同的蛋白質裂解位點，而這對于后續提到的去除GST標記方法尤其重要。圖4描述了我們推薦克隆方法的過程和步驟。（1）pGEX載體都有一個包含多個限制性酶切位點的多克隆位點（MSC），這些位點因pGEX載體而異。如表2所述。此外，所有的pGEX載體均含有三個終止密碼子，覆蓋了MSC之后DNA菌株上所有的三個可能的閱讀框，以確保所表達的蛋白質本身并不包含終止密碼子。圖4：在目標蛋白質上添加GST標簽的克隆

PureCube磁珠使用指南2022/07/28

磁珠蛋白純化操作指南磁珠的使用采用圖1中的6個簡易步驟，即可實現蛋白的純化。圖1：使用磁珠/MagBeads純化蛋白質的標準流程。步驟1：通常采用磁珠純化的蛋白來源于細胞裂解物，此時目的蛋白與細胞表達的其他蛋白混合在一起。第2步：向細胞裂解物中加入適量的磁珠。此步建議使用無菌移液器吸頭。第3步：孵育磁珠-蛋白質混合物。孵育時建議采用較慢但穩定的速度（不能渦旋）,室溫下持續約2小時即可。圖1中采用的是微型離心管，但也可以使用無菌的falcon管。第4步：孵育完成后，所有的目的蛋白質都應該結合到磁珠

NTA vs. IDA：NTA和IDA的區別和選擇2022/07/28

如果您正在使用固定化金屬親和層析（IMAC）純化蛋白，您使用的金屬離子很可能是通過次氮基三乙酸（NTA）或者亞氨基二乙酸(IDA)偶聯到樹脂基質上的。在眾多可用于IMAC的螯合配體中，NTA和IDA是常用的兩種。您更傾向于使用哪種螯合配體？您為何選擇該配體？這兩種配體有什么不同?為了幫助我們的客戶在充分了解產品的情況下做出訂購決定，我們以PureCubeNi-NTA瓊脂糖和PureCubeNi-IDA瓊脂糖為例，詳細介紹二者的異同。兩種配體在結構上和化學上有何不同？螯合配體如何影響蛋白結合載量？

膜蛋白研究利器-納米磷脂盤2022/07/28

膜蛋白在細胞與外界進行物質、信息、能量交換中具有重要的作用和意義，因此膜蛋白成為了當前研究熱點之一。但是由于膜蛋白存在疏水部分，因此在體外容易聚合，所以需要找到一種合適的方法讓膜蛋白能夠穩定地存在于細胞外的環境。傳統的膜蛋白提取方法是利用去污劑來提取，但是經過去污劑提取后的膜蛋白其構象和生物學活性都較易因為各種問題被破壞，作為“鑲嵌”在細胞膜磷脂雙分子層中的蛋白，一旦脫離了其穩定的天然膜環境，便會影響甚至失去其生理功能，即使膜蛋白被成功地提取出來，也達不到好研究結果。早在上個世紀90年代，來自U

為什么在生產時磁珠損耗會增加？2022/07/28

擴大生產規模時，與小批量生產相比，生產磁珠的問題之一是大批量生產可能會導致更大且不成比例的磁珠損耗，即使磁珠的生產條件與小批量的生產過程相似，似乎也會發生這種情況。通常情況下，當放大生產工藝的規模，會有更高的生產效率，但當使用傳統的磁性分離器放大磁珠生產規模時，實際情況卻并非如此。到底是怎么回事？當使用傳統（非均勻）分離裝置時，磁場會隨著與磁體距離的增大而減小。磁力與磁場變化有關，因此也會隨著與磁體距離的增加而減小。當放大磁珠處理的規模時，與磁鐵距離會增加，但磁鐵的重量卻不能按比例增加以抵消這個

PureCube DIBMA–無去污劑法增溶膜蛋白2022/07/27

去垢劑（如SDS，n-辛基-β-d-葡萄糖苷(OG),n-十二烷-β-d-麥芽糖苷（DDM））被廣泛用于膜蛋白的提取，但不同去垢劑有著不同的缺點，例如短鏈非離子型去垢劑會影響膜蛋白的功能特性。幾乎可以確定的是如果將天然的磷脂雙分子層從膜蛋白中移除，膜蛋白的功能會受到影響。目前可通過MSP-nanodiscs（膜結構蛋白-納米磷脂盤）（圖一）或者無去污劑聚合物體系（圖二）（苯乙烯-馬來酸共聚物（SMAs）、二異丁烯-馬來酸(DIBMA)）來模擬天然磷脂雙分子層。使用后者可直接從細胞中提取膜蛋白，而

Cube Biotech Rho1D4-專用于膜蛋白的抗體2022/07/27

Rho1D4是指牛視紫紅質的細胞內C末端的最后9個氨基酸，它是由與該序列特異性結合的單克隆抗體而命名的。通過與Rho1D4抗體結合，此序列可作為一種高特異性的純化標簽用于膜蛋白的純化。采用分子生物學方法將目的膜蛋白的C末端加上Rho1D4標簽（圖1），具有該序列的目的蛋白可被載有rho1D4抗體的親和基質特異性結合，隨后目的蛋白可通過添加過量的Rho1D4肽與基質抗體競爭性結合被洗脫下來，這種洗脫條件比改變pH更加溫和。圖1：具有3個跨膜結構域的假設膜蛋白，將序列為TETSQVAPA的Rho-1

“化學發光生產環節的重點要素”2022/07/26

1、穩定的可重復性分離條件？體外診斷（IVD）和其它一些的生物科技企業，在每一次磁珠功能化生產的過程以及在后續的分裝環節中，都會期望能獲得穩定的可重復性。可是，運用傳統的磁性分離設備時，并非所有磁珠會處于相似的分離狀態，例如：一些磁珠*受到磁力的作用；而一些磁珠會因遠離磁鐵僅受到微弱的磁力作用；或一些磁珠相對靠近磁鐵而受到過強的磁力，可導致磁珠和鏈接在其上的生物分子存在被破壞的風險（如下圖所示）。圖1展現對比了磁珠在傳統磁鐵（灰色）作用下，由于位置不同，受到的磁力不均勻；在SEPMAG®生物磁性

建立膜蛋白文庫的有效方法2022/07/26

細胞生物膜所含的蛋白稱為膜蛋白，其承擔了大多數生物膜的功能，包括細胞與外界進行物質運輸、信息傳遞、能量交換等發揮著重要作用。在人體蛋白中，有大約30%是膜蛋白，FDA批準的新藥中，大多數都以膜蛋白為靶點。隨著對膜蛋白生物作用機理的深入研究，新的細胞調控作用靶點被不斷發現，從而使選擇性作用于靶點的新藥能更有針對性的開發。例如現在市面上有不少基于細胞轉運通道蛋白設計的藥物，最常見一類抗高血壓藥，其主要功能是作為鈣離子通道阻滯劑，選擇性地同鈣離子通道結合以阻滯鈣離子進入細胞，從而導致心肌收縮力減弱、心

Cube Biotech新型蛋白純化DTT和EDTA高耐受產品2022/07/26

組氨酸標簽是應用最為廣泛的蛋白純化標簽。其優點包括標簽尺寸小、低免疫原性、在蛋白自然和變形狀態下都保持有效性，在去污劑以及多種添加劑成分環境下均保持有效等多方面優勢。為了進一步提高純化體系在純化過程中的穩定性，德國CubeBiotech生物公司現新推出了新型PureCube100INDIGONi-Agarose系列產品。這款新型的填料是以高交聯度且平均直徑為100µm的瓊脂糖為基材，其可用于更高流速要求的重力柱純化和FPLC方面應用。PureCube100INDIGONi-Agarose系列采用

Nanodisc配合冷凍電鏡提升膜蛋白的分辨率2022/07/26

Toxic,hot,andspicy:Nanodiscsimprovemembraneproteinresolutionincryo-EM(作者：CubeBiotech)Nanodisc結合冷凍電鏡應用時，Nanodisc提升了通過冷凍電鏡對膜蛋白的解析率，同時表現了功能性磷脂所扮演的重要角色。Thelastfewyearshaveseenatremendousincreaseinhigh-resolutionproteinstructuressolvedbycryoelectronmicros

Nanodisc 在 GPCR 抗體研發中的應用2022/07/26

一、GPCR簡介GPCR（Guanosine-bindingProteinCoupledReceptor）中文名稱為G蛋白偶聯受體，是一種膜蛋白受體。GPCR作為細胞信號傳導中的重要蛋白，其共同點是其蛋白體結構中都有七個跨膜結構。研究顯示GPCR參與了很多細胞信號轉導過程，當膜外的配體作用于該受體時，該受體的膜內部分與G蛋白發生結合，從而激活G蛋白。G蛋白可通過兩種途徑傳遞細胞外的信息：第一種方式是打開跨膜離子通道，讓外界的離子進入；第二種方式是激活第二信使，如：cAMp、IP3/DAG等。簡單

無細胞蛋白表達2022/07/26

選擇細胞裂解物對活細胞中重組蛋白表達是很有用的，它們可以裂解真核細胞或細菌細胞，并去除蛋白質中所有不需要表達的成分。這些裂解物可以與DNA模板和其他所需成分在試管中結合，進行蛋白質的表達（1）。Figure1:Cell-freeexpressioncomponentsａndadditivesFigure2:Productionofatargetproteinwithlivingcells優勢1.無細胞反應很容易建立，僅需幾個小時就可以完成蛋白質表達。這種方法可以用小規模（50-100微升）的反應

如何利用GST標簽蛋白純化蛋白（上）2022/07/26

圖1：GST標簽的蛋白什么是GST標簽？目前有多種用于蛋白純化的親和標簽，而GST標簽就是其中之一。GST是谷胱甘肽巰基轉移酶的簡稱，指的是整個蛋白質，而不是像Rho1D4標簽僅指幾個氨基酸。自20世紀80年代末GST標簽就開始用于蛋白質純化（Smith&Johnson1988），并被確立為需要高純度的蛋白質純化試驗的可靠方法（Harper&Speicher2013）。GST標簽的大小為26kDa，因此與其它蛋白質親和標簽相比確實很大。從理論上講，它可以與蛋白質的C端或N端融合（Terpe200

膜蛋白研究利器（1）2022/07/26

膜蛋白研究利器：Rho1D4親和純化體系+Nanodiscs(納米磷脂盤)在人體蛋白中有大約30%是膜蛋白，膜蛋白在細胞進行物質、信息、能量交換中發揮著重要作用，膜蛋白也成為大多數重要的藥物研究對象和靶點。ＦＤＡ批準的新藥中就有大多數都以膜蛋白為靶點，幾乎所有的膜蛋白都是研究熱點。然而讓人吃驚的是，樂觀估計，目前已經被透徹研究清楚結構的膜蛋白僅占膜蛋白總量的1%。究其原因，是因為膜蛋白依附或橫跨在細胞膜的磷脂雙分子層上，使膜蛋白的表達、純化、結晶和結構分析都有很大難度。市面上有一些專用于膜蛋白提

如何獲得純凈且活性的膜蛋白2022/07/26

Rho1D4tag/1D4tagRho1D4，也叫“1D4”，是一種親和標記物，包含了九種氨基酸(T-E-T-S-Q-V-A-P-A)。該標記物優先與目標蛋白的C端結合。瓊脂糖和磁珠與相對應的Rho1D4-抗體能夠純化標記了Rho1D4標簽的蛋白。Rho1D4蛋白純化實驗不僅擁有基于其它抗體為基礎的蛋白純化特別高的專一特異性，并且蛋白的產量也很高。關于Rho1D4的更多信息，我們撰寫了一本指南為您提供所有必須信息。產品技術參數用途特異性結合和純化Rho1D4標記的蛋白特異性具有與Rho1D4標記

INDIGO - 新一代His標簽純化產品線2022/07/26

His-tag標簽的蛋白純化是迄今為止在生物學和生物化學中常用的技術之一。然而，這種技術并非沒有其局限性，常見的his-tag標簽純化技術，如Ni-NTA，與蛋白酶抑制劑或還原劑等緩沖液中常用的物質不相容。我們研發的INDIGO配基取代了傳統的NTA或IDA配基。INDIGO產品的優勢Figure1:His-tagproteinpurificationusingINDIGO-NiagarosebeadsINDIGO是什么?INDIGO是一種新開發的配基，可將二價金屬離子與瓊脂糖微球結合，類似于N

化學發光試劑盒生產過程中，避免磁珠不可逆的聚集問題2022/07/14

避免生產過程中不可逆的聚集問題批次間一致性是試劑盒水平可重復性的關鍵。但在非均質系統中，不可逆的聚集是批次間變異性的主要來源之一。而如果所有磁珠都受到與均勻磁性系統相同的力，則聚集的風險會大大降低。傳統的磁性分離器所產生的磁場始終會由于磁力隨距離的變化而變化。因此，遠離留滯區域的磁珠受到的力很小，并且需要更長時間受到力的作用才能分離。在分離的過程中，在留滯區域附近的磁珠會長時間承受較大的力。長時間暴露于高強度磁場下會升高不可逆的磁珠聚集風險，這便會導致大量批次間不一致。在大批量生產中，技術人員和