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2015
12-01

Western Blot常見問題及注意事項
WB常見問題常見問題解決對策及注意事項兩快玻璃板之間灌膠,膠總是不平玻璃沒有洗干凈，應該要洗得非常干凈過硫酸銨和TEMED的加量不合適，加量相對較多，凝膠凝固過快，也會造成膠不平現象加完試劑以后沒有很好的搖勻，導致有些部位的聚合劑濃度過高，聚合相對較快造成膠不平膠總是漏避免玻璃邊緣（與膠條接觸處）破損膠條一定要干，跑完電泳后，膠條就放在實驗臺上晾著。下面的膠條注意不要老化，如果有裂紋的話用保鮮膜墊在上面，也可以有效防止漏膠將兩塊玻板擺放*對齊，底部處于同一個平面膜上有明顯氣泡操作時將氣泡*排除靠
2015
12-01

蛋白印跡用緩沖液及洗滌液
轉印緩沖液提供了電極之間的電連續性，其必須是導電的。它還提供了一個化學環境，能維持蛋白質的溶解度，又不妨礙轉移過程中蛋白質吸附到膜上。傳統的轉印緩沖液包含緩沖系統和甲醇。Tris甘氨酸緩沖液，常用于槽轉印系統中。這種緩沖液的pH值為8.3，比大多數蛋白的等電點（pI）要高。在凝膠上分離的蛋白質帶負電荷，向陽極遷移。由于槽內的緩沖液是混合的，故轉移過程中的離子分布保持相對恒定。在蛋白測序應用中，建議使用10mMCAPS緩沖液（pH=11）。凝膠電泳緩沖液中殘留的甘氨酸導致蛋白測序過程中出現高背景。
2015
12-01

尼龍膜、PVDF膜、NC膜區別
轉印膜：用于蛋白質和核酸的轉移和檢驗過程的微孔膜。Southernblot：又稱Southern印跡雜交，是研究DNA圖譜的基本技術。Northernblot：又稱Northern印跡雜交，是檢測RNA的基本技術。Westernblot：又稱Western印跡雜交，是蛋白質檢測分析的基本技術。轉印膜在蛋白質和核酸的轉移和檢測過程中應用廣泛，不同的轉印膜規格和參數不同，選擇正確、均一穩定的轉印膜對達到的實驗結果起到關鍵性的作用。常用的三種轉印膜：硝酸纖維素膜（NC膜）、帶正電的尼龍膜（N66膜）、
2015
12-01

實驗室詳解單克隆抗體的制備過程
單克隆技術又名雜交瘤技術。由G.K?hler和Milstein1975年創立。主要原理是利用產生抗體的B細胞與腫瘤細胞雜交融合成雜交瘤細胞，生產抗體。單克隆抗體的制備過程主要有以下六個環節，具體為抗原指標、免疫動物選擇、免疫程序的確定、免疫、細胞雜交與選擇培養。單抗制備步驟1、抗原制備制備單克隆抗體的免疫抗原，從純度上說雖不要求很高，但高純度的抗原使得到所需單抗的機會增加，同時可以減輕篩選的工作量。因此，免疫抗原是越純越好，應根據所研究的抗原和實驗室的條件來決定。2、免疫動物的選擇根據所用的骨髓
2015
12-01

Western/ELISA顯色底物大盤點
一、HRP辣根過氧化酶是常見的酶促發光或顯色的交聯酶，由于HRP比活高、特異性更強、分子量小（40kD）、穩定性好和作用底物范圍廣的優點而得到廣泛使用。HRP的底物種類有不少，主要可以分為化學發光底物和生色底物2大類:1.化學發光底物：化學發光底物主要考慮的是：發光信號強弱——發光信號當然越強越好，強發光信號持續的時間也是越長越好，還有就是背景低靈敏度高。原理：試劑中的發光物在辣根過氧化物酶的作用下發生氧化降解，并發射波長為428nm的光，此光可經x光膠片(放射自顯影片)感光記錄下來。常用的化學
2015
12-01

CTAB作用原理
物理性狀呈白色或淺黃色結晶體粉末狀，有刺激氣味，易溶于異丙醇，可溶于水，震蕩時產生大量泡沫。能與陰離子、非離子、兩性表面活性劑有良好的配位性。具有優良的滲透、柔化、乳化、抗靜電、生物降解性及殺菌等性能。作用原理CTAB是一種陽離子去污劑,可溶解細胞膜,具有從低離子強度的溶液中沉淀核酸和酸性多聚糖的特性。它能與核酸形成復合物：在高鹽溶液中（0.7mol/LNaCl）是可溶的,當降低溶液鹽濃度到一定程度（0.3mol/LNaCl）時,從溶液中沉淀,通過離心就可將CTAB-核酸的復合物與蛋白、多糖類物
2015
11-12

二甲基亞砜配制及作用
二甲基亞砜物理性質二甲基亞砜，英文名稱DMSO。無色粘稠液體。有吸濕性。能與水、乙醇、丙酮、乙醛、吡啶、乙酸乙酯、苯二甲酸二丁酯、二惡烷和芳烴化合物等任意互溶，不溶于乙炔以外的脂肪烴類化合物。二甲基亞砜用途廣泛，可用作溶液和反應試劑。DMSO在有機合成，醫藥、電子等方面均有應用。二甲基亞砜的合成二甲基亞砜一般采用二甲硫醚氧化法制得，由于所用的氧化劑和氧化方式不同，因而有不同的生產工藝。甲醇二硫化碳法甲醇和二硫化碳為原料，以γ-Al2O3作催化劑，先合成二甲基硫醚，再與二氧化氮（或硝酸）氧化得二甲
2015
11-12

紅細胞裂解液的工作原理及配制方法
紅細胞裂解液裂解是一種比較溫和的紅細胞去除方法，它能既不損傷有核細胞又能充分的去除紅細胞。那么紅細胞裂解液的原理是怎么樣的呢？裂解液作用原理血紅細胞表面上有紅細胞專屬的表面抗原，當裂解液中含可以攻擊特定紅細胞表面抗原的酶的時候就只會造成紅細胞的變形，生物通道擴大膨脹裂解，或者引起紅細胞的變形，而不會攻擊其他細胞；另外紅細胞有自己的電負性，滲透脆性（通常是一些非酶細胞裂解液的突破點），懸浮穩定性，這都是區別于其他種類細胞的區別點。紅細胞裂解液就是利用這些特性裂解紅細胞的。另外紅細胞裂解液不能達到1
2015
11-12

蘇丹Ⅲ染色液的作用
蘇丹Ⅲ本身是一種有機物，所以易溶于脂肪，這個就是化學中的相似相溶原理。蘇丹Ⅲ在脂肪中的溶解度比在酒精中的溶解度大，當用蘇丹Ⅲ的酒精溶液處理含有脂肪的生物組織時，酒精中的蘇丹Ⅲ進入脂肪中，將脂肪染成橘黃色。蘇丹Ⅲ適合用于生物脂肪材料的鑒定，可在光學顯微鏡下看到被染成橘黃色的小粒。蘇丹Ⅲ染色液染色步驟取材：取一粒浸泡過的花生種子，去掉種皮。切片：用刀片在花生子葉的橫斷面上平行切下若干薄片，放入盛有清水的培養皿中待用制片：從培養皿中選取薄的切片，用毛筆蘸取放在載玻片中央；在花生子葉薄片上滴2-3滴蘇丹
2015
11-12

蛋白酶K的作用及使用方法
白酶K，是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶，從林伯氏白色念球菌中純化得到，它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵。由于蛋白酶K具有降解天然蛋白質的能力，因此多用于生物樣品中蛋白質的一般降解；其消化過程中通常加入EDTA以抑制依賴于mg2+的核酸酶的作用。蛋白酶K的一般工作濃度是50-100μg/ml。在較廣的pH范圍內(pH4-12.5)均有活性。蛋白酶K可替代DEPC處理RNA抽提用的離心管和槍頭，實現滅活RNaseA的目的，也用于處理RNase-Free的水。充分降解組織或細胞中蛋白質分子
2015
10-22

氯化硝基四氮唑藍（NBT）的作用
氯化硝基四氮唑藍（NBT）又稱作硝基四氮唑藍。是一種黃色粉末,易吸濕，溶于水和乙醇，微溶于乙酸乙酯。其還原物（Diformazan）為黑紫色結晶性粉末，溶于多數有機溶劑。NBT的作用氯化硝基四氮唑藍（NBT）可以作為脫氫酶和其它過氧化酶的底物。用于測定葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（glucose-6-phosphatedehydrogenase）；也是凝血因子I（fibrinogen）的沉淀試劑。氯化硝基四氮唑藍（NBT）是堿性磷酸酶底物之一，與BCIP一起,在堿性磷酸酶的催化下生成不溶性的藍色產物。
2015
10-22

溶菌酶的作用和優點
溶菌酶（lysozyme）又稱胞壁質酶（muramidase），主要存在于雞蛋清及動物的眼淚中。是一種能水解致病菌中黏多糖的堿性酶。主要通過破壞細胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之間的β-1,4糖苷鍵，使細胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，導致細胞壁破裂內容物逸出而使細菌溶解。1溶酶菌的作用溶菌酶對革蘭陽性菌、好氧性孢子形成菌、枯草桿菌、地衣型芽孢桿菌等都有抗菌作用，而對沒有細胞壁的人體細胞不會產生不利影響。溶菌酶還可與帶負電荷的病毒蛋白直接結合，與DNA、RNA、脫輔基蛋白形成復鹽，使
2015
10-22

甜菜堿的作用
在于動植物體內，在營養物質的代謝中起著十分重要的作用。是非常重要的滲透調節物質，對于植物增強抗逆性，比如抗鹽堿，耐旱均十分重要。甜菜堿是一種堿性物質，吸潮的鱗狀或棱狀結晶，熱310°左右分解，味甜。極易溶于水，易溶于甲醇，溶于乙醇。經濃氫氧化鉀溶液的分解反應，能生成*胺，并釋放出*胺。耐高溫。甜菜堿的作用1維持細胞滲透壓當植物細胞受鹽堿或水分脅迫時，細胞質中積累大量有機滲透調節劑如甜菜堿，將細胞質中的無機滲透調節劑擠向液泡，使胞質與細胞內液泡外環境維持滲透平衡，這樣避免了細胞質高濃度無機離子對酶
2015
10-19

吐溫-80的作用
吐溫-80又稱為聚氧乙烯去水山梨醇單油酸酯、聚乙氧基油酸清涼茶醇、Polysorbate80、Monitan。1性狀淡黃色粘稠狀液體;微有脂肪臭，味微苦。易溶于水、乙醇、氯仿，不溶于液狀石蠟。5%水溶液pH6-8。HLB值為15。為聚氧乙烯去水山梨醇單油酸酯和一部分聚氧乙烯雙去水山梨醇單油酸酯的混合物。2簡介吐溫80是一個親水性的表面活性劑，具有很強的破裂細胞膜的作用而引起刺激性，溶血性和組胺釋放（致敏性）。吐溫80作為一個聚合物本身純度波動極大，高純度的吐溫80是無色透明的，而大多數吐溫產品則
2015
10-08

TriQuick總RNA提取試劑
TriQuick總RNA提取試劑是一種通用的總RNA抽提試劑，是以異硫氰酸胍/苯酚為基礎的RNA提取方法。適用于動植物細胞或組織及細菌的總RNA抽提，可有效防止RNA在提取過程中的降解。獲得的RNA可直接用于Northern雜交，純化mRNA，體外翻譯，RNase保護實驗，RT-PCR以及cDNA克隆等一系列操作。TriQuick中還含有溴甲酚綠-甲基紅指示劑，可以根據顏色變化來監測提取RNA的pH環境。溴甲酚綠-甲基紅指示劑的作用：溴甲酚綠pH3.8黃色——4.5綠色——5.4藍色甲基紅pH4
2015
10-08

重蒸酚的性質
1特性重蒸酚（Phenol，C6H5OH）又名石炭酸、酚、苯酚、石炭酸、羥基苯。是一種具有特殊氣味的無色針狀晶體，有毒，是生產某些樹脂、殺菌劑、防腐劑以及藥物（如阿司匹林）的重要原料。也可用于消毒外科器械和排泄物的處理，皮膚殺菌、止癢及中耳炎。熔點43℃，常溫下微溶于水，易溶于有機溶劑；當溫度高于65℃時，能跟水以任意比例互溶。苯酚有腐蝕性，接觸后會使局部蛋白質變性，其溶液沾到皮膚上可用酒精洗滌。遇空氣和光變紅，遇堿變色更快。2制備純凈的苯酚使用時不需要重蒸。市售的酚一般為紅色或黃色結晶體,使用
2015
10-08

蛋白胨的用途
蛋白胨，英文名稱：peptone，是有機化合物。蛋白胨是將肉、酪素或明膠用酸或蛋白酶水解后干燥而成的外觀呈淡黃色的粉劑，具有肉香的特殊氣息。蛋白質經酸、堿或蛋白酶分解后也可形成蛋白胨。在胃內蛋白質的初步消化產物之一就是蛋白胨。蛋白胨富含有機氮化合物，也含有一些維生素和糖類。1蛋白胨的用途蛋白胨可以作為微生物培養基的主要原料，在抗生素、醫藥工業、發酵工業、生化制品及微生物學科研等領域中的用量均很大，可以用來治療消化道疾病；不同的生物體需要特定的氨基酸和多肽，因此存在著各種蛋白胨。2蛋白胨的種類蛋白
2015
09-25

制霉菌素的作用
制霉菌素是一種多烯型抗生素，1950年發現土壤微生物Streptomycesnoursei能分泌一種抗霉菌的物質，從而發現了*種抗霉菌的抗生素。制霉菌素具有共軛多烯大環內酯結構，能抑制真菌和皮蘚菌的活性，對細菌無抑制作用。制霉菌素的物化性質黃色或黃棕色粉末，有特殊氣味及引濕性。微溶于水、甲醇、乙醇，不溶于丙酮、氯仿。對空氣、光、熱、水、酸或堿均不穩定。抗真菌抗生素。醚及氯仿。對空氣、光、熱、水、酸或堿均不穩定。抗真菌抗生素。制霉菌素的特性對念珠菌屬的抗菌活性高，新型隱球菌、曲菌、毛霉菌、小孢子菌
2015
09-22

甘油的性質和用途
甘油又名丙三醇是無色味甜澄明黏稠液體，無臭，有暖甜味。能從空氣中吸收潮氣，也能吸收硫化氫、氰化氫和二氧化硫。難溶于苯、氯仿、二硫化碳、石油醚和油類。相對密度1.26362，熔點17.8℃，沸點290.0℃（分解），折光率1.4746，閃點（開杯）176℃。丙三醇是甘油三酯分子的骨架成分。當人體攝入食用脂肪時，其中的甘油三酯經過體內代謝分解，形成甘油并儲存在脂肪細胞中。因此，甘油三酯代謝的終產物便是甘油和脂肪酸。甘油的用途氣相色譜固定液（高使用溫度75℃，溶劑為甲醇），分離分析低沸點含氧化合物、胺
2015
09-18

DTT（二硫蘇糖醇）的作用
DTT（DL-Dithiothreitol）中文名為二硫蘇糖醇。分子式為C4H10O2S2，分子量為154.25，為常用還原劑，有抗氧化作用。DTT和巰基乙醇相比，作用相似，但DTT的刺激性氣味要小很多，毒性也比巰基乙醇低很多。而且DTT比巰基乙醇的濃度低7倍時，兩者效果相近。DDT的特性DTT是一種很強的還原劑，其還原性很大程度上是由于其氧化狀態六元環（含二硫鍵）的構象穩定性。它的氧化還原電勢在pH為7時為-0.33伏。由于容易被空氣氧化，因此DTT的穩定性較差；但冷凍保存或在惰性氣體中處理能

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