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石蠟切片免疫組化實驗步驟2018/07/13

石蠟切片免疫組化實驗步驟1.石蠟切片置于67℃烘箱中，烘片2小時，脫蠟至水，用pH7.4的PBS沖洗三次，每次3分鐘（3×3’）。2.取一定量pH=6.0檸檬酸鹽緩沖液，加入微波盒中，微波加熱至沸騰，將脫蠟水化后的組織切片置于耐高溫塑料切片架上，放入已沸騰的緩沖液中，中檔微波處理10分鐘，取出微波盒流水自然泠卻，從緩沖液中取出玻片，先用蒸餾水沖洗兩次，之后用PBS沖洗2×3’。（注：不是所有的抗體都需要微波修復的，視具體情況而定）3.每張切片加1滴3%H2O2，室溫下孵育10分鐘，以阻斷內源性過

間接ELISA中試劑的配制及反應流程2018/07/13

實驗試劑1.包被緩沖液：(0.05mol/L，pH9.6的碳酸鹽緩沖液)Na2CO31.59gNaHCO32.93g蒸餾水1000ml4℃保存，一周內用完。2.磷酸鹽緩沖液(PBS，PH7.4)NaCl8.0gKH2PO40.2gKCl0.2gNa2HPO4.12H2O3.65g蒸餾水1000ml3.洗滌液(0.01mol/L，pH7.4的PBST)1LPBS中加入0.5mlTween-204.封閉液(5%脫脂奶粉)5g脫脂奶粉加入100mlPBS緩沖液中。5.一抗及二抗稀釋液(2%脫脂奶粉)2

細菌總蛋白和膜蛋白提取方法2018/07/13

實驗試劑裂解液（pH8.5-9.0）：50mMTris-HCl，2mMEDTA,100mMNaCl，0.5%TritonX-100，調pH值至8.5-9.0備用；溶菌酶；蛋白酶抑制劑PMSF；1%SDS溶液；Trizol裂解液；無水乙醇；異丙醇；0.3M鹽酸胍；疏水性蛋白提取液（非裂解液）：1%TritonX-114，150mMNaCl,10mMTris-HCl，1mMEDTA，調pH值至8.0備用。實驗設備高速離心機；超聲儀；透析袋；EP管；渦旋儀；水浴鍋等。實驗步驟1.從新鮮樣品中提取總蛋白

已凍存細胞的傳代培養2018/07/13

實驗試劑細胞培養液成分為RPMI1640基本培養液10%胎牛血清1%三抗，PBS，凍存培養液(含10%DMSO或甘油)，Trypsine-EDTA消化液，液氮實驗設備水浴鍋，35mm培養皿，37℃培養箱，無菌凍存管，低溫冰箱，超低溫冰箱實驗材料已凍存的HEK293和HeLa細胞實驗步驟1.細胞的復蘇1)保存細胞的冷凍管直接投入37℃溫水，不時搖動令其盡快融化，解凍1分鐘；2)取出冷凍管，用酒精消毒后打開管蓋，吸出細胞懸液，注入離心管并滴加10倍以上培養液，混合后低速離心，除去上清液，再用培養液重

細胞培養之問題解答2018/07/12

1、冷凍管應如何解凍？取出冷凍管后，須立即放入37℃水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全，預防冷凍管之爆裂。2、細胞冷凍管解凍培養時，是否應馬上去除DMSO？除少數特別注明對DMSO敏感之細胞外，絕大部分細胞株（包括懸浮性細胞），在解凍之后，應直接放入含有10-15ml新鮮培養基之培養角瓶中，待隔天再置換新鮮培養基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附之問題。3、可否使

細胞化學染色方法2018/07/12

實驗原理1.細胞經甲基綠一呱咯寧混合液處理后，其中的DNA和RNA出現不同的呈色反應，一般認為這是由于帶有負電荷的核酸對堿性染料呱咯寧和甲基綠具有親和力，且這兩種染料的作用有選擇性，甲基綠染高聚分子的DNA呈藍綠色，呱咯寧染低聚分子的RNA呈紅色。由此對細胞中的DNA和RNA進行定位、定性、和定量分析。2.由于不同的蛋白質分子所帶的堿性和酸性基團的數目不同，在pH值不同的溶液中，蛋白質分子所帶的凈電荷多少不同。如在生理條件下，整個蛋白質所帶負電荷多，則為酸性蛋白質；帶正電荷多，則為堿性蛋白質。據

總蛋白和膜蛋白提取方法2018/07/12

膜蛋白具有多種功能，在細胞識別、細胞信號轉導、運輸等有著中著重要的角色，因此也是的藥物靶點。抽提膜蛋白主要是進行蛋白組分析：常用的實驗是非變性膠電泳、酶活分析、SDS-PAGE、westernblot等。本文敘述了總蛋白的抽提方法、和膜蛋白的提取方法。一、從新鮮樣品中提取總蛋白(簡易法)1.自配裂解液(pH8.5-9.0)：50mMTris-HCl，2mMEDTA,100mMNaCl，0.5%TritonX-100，調pH值至8.5-9.0備用;用前加入100μg/ml溶菌酶，1μl/ml的蛋白

抗體標記與檢測指南2018/07/11

科技文獻中有很多抗體標記方法指南，我們往往難以選擇方法。本指南可以幫助您更好的理解標準化學標記方法及它們的優缺點，同時還介紹了Lightning-Link一步法抗體標記技術。該技術極大簡化了抗體標記步驟，利用該技術標記抗體不需要您具備太多化學方面的知識，并且手頭操作時間僅需短短的30秒！抗體與標記物在多種免疫實驗（流式細胞術,ELISA,westernblotting,免疫組化等）中，抗體被廣泛應用于檢測和定量抗原。直接識別抗原的抗體被稱為一抗（primaryantibody），賦予檢測的特異性

預防細胞污染及污染后對策2018/07/11

污染向來是在細胞培養中的大問題。預防或治理污染是細胞培養成功的關鍵因素。我們在細胞培養時，在開始階段就要十分重視污染問題，否則會前功盡棄，這樣不僅浪費時間，也會浪費人力、物力。(一)有哪幾類污染？在細胞培養過程中的污染不只是指微生物，而且還包括所有混入培養環境中的、對細胞生存有害或造成細胞不純的物質，包括生物和化學物質。1、細菌污染細菌污染是實驗室細胞培養中常見的污染，即使在細胞培養液中加入了抗菌素，也可能因為操作不慎而引起污染。常見的有革蘭氏陽性菌，如枯草桿菌以及大腸桿菌、假單胞菌等革蘭氏陰性

抗體的使用和保存方法2018/07/11

抗體，無論是保存還是運輸，都要避免反復凍融。反復凍融，冰晶會破壞抗體的空間結構，導致蛋白變性形成多聚體，從而降低抗體的結合能力，也加快了抗體球蛋白的降解速度。抗體保存得當與否，直接決定了抗體的活性和使用效果，如果抗體保存得當，Bioss的抗體活性大部分都可以維持數年。下面就給大家講解下，Bioss抗體的使用和保存方法：一、收到抗體后的操作收到Bioss抗體后（大部分抗體是溶液態），請務必在4℃，12000rpm，離心3分鐘，再打開管蓋進行分裝、溶解和保存（如果抗體體積小于50ul，請延長離心時間

不看此文，別貿然開始ELISA實驗2018/07/10

酶聯免疫吸附（ELISA）可以：（1）免疫酶染色各種細胞內成份的定位；（2）研究抗酶抗體的合成；（3）顯現微量的免疫沉淀反應；（4）定量檢測體液中抗原或抗體成份。實驗原理雙抗體夾心法（常用于測定抗原）用特異性抗體包被于固相載體，經洗滌后加入含有抗原之待測樣品，如待檢樣品中有相應抗原存在，即可與包被于固相載體上的特異性抗體結合，經保溫孵育洗滌后，即可加入酶標記特異性抗體，再經孵育洗滌后，加底物顯色進行測定，底物降解的量即為欲測抗原的量。實驗步驟一、材料準備1.實驗材料：血清、血漿、體液2.實驗儀器

實時熒光定量PCR（realtime PCR）2018/07/09

所謂實時熒光定量PCR技術，是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實驗材料細胞樣品試劑、試劑盒RNA提取試劑盒熒光定量PCRMixTRIZOLdNTP逆轉錄酶MMLV異丙醇Taq酶DEPC水ddH2OTEMgCl2瓊脂糖溴化乙錠MOPS甲醛乙酸鈉EDTAEB溴酚蘭儀器、耗材離心管離心機風光光度計電泳槽凝膠板RealtimePCR儀實驗步驟一、樣品RNA的抽提1.取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。2.兩相

凝膠遷移實驗（EMSA）2018/07/09

實驗方法原理凝膠遷移或電泳遷移率實驗（EMSA-electrophoreticmobilityshiftassay）是一種研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用的技術，可用于定性和定量分析。這一技術初用于研究DNA結合蛋白，目前已用于研究RNA結合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常將純化的蛋白和細胞粗提液和32P同位素標記的DNA或RNA探針一同保溫，在非變性的聚丙烯凝膠電泳上，分離復合物和非結合的探針。DNA-復合物或RNA-復合物比非結合的探針移動得慢。同位素標記的探針依研究

小鼠成纖維細胞2018/07/07

培養操作及注意事項說明一．產品簡介1、細胞名稱：L929；小鼠成纖維細胞2、生長特性：□貼壁□懸浮□半懸浮半貼壁3、細胞生長條件：培養條件90%MEM+10%FBS+1%P/S溫度37℃空氣條件5%CO2,95%AIR傳代方法1:2傳代，2~3天換液凍存條件90%FBS+10%DMSO二．使用方法1、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：取出25cm2培養瓶，75%酒精擦拭培養瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細胞培養箱中靜置3-4小時以穩定細胞狀態，然后換用新鮮*培養液繼續培養或進行傳代。

免疫熒光標記實驗流程（IF）2018/07/02

免疫熒光標記實驗流程（IF）免疫熒光單標記方法免疫熒光單標記是指只標記一種蛋白質分子，方法比較簡單，只要按照染色步驟去做，通常不存在太多的問題。但要注意固定液的選擇，固定液選擇的合適與否，可能會直接影響染色結果。具體染色方法如下。免疫熒光標記實驗流程（IF）1、所需材料與試劑a,培養在蓋玻片或玻璃培養皿中融合程度達到60%-70%的細胞。b,一抗、FITC或TRITC標記的二抗。c,4%多聚甲醛固定液或冷丙酮固定液(-20℃預冷20min)。d,封閉液。e,0.01mol／LPBS緩沖液。2、染

人淋巴瘤細胞，U-9372018/06/05

一．產品簡介1、細胞名稱：U-937;人淋巴瘤細胞2、生長特性：□貼壁□懸浮□半懸浮半貼壁3、細胞生長條件：培養條件90%1640+10%FBS+1%雙抗溫度37℃空氣條件5%CO2，,95%AIR傳代方法1:2傳代，2~3天換液凍存條件90%FBS+10%DMSO二．使用方法1、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：取出細胞培養瓶，75%酒精擦拭培養瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細胞培養箱中靜置2-3小時以穩定細胞狀態，然后離心換用新鮮*培養液繼續培養或進行傳代。2、細胞傳代：待細胞達

DNA Marker的選購與問題解答2018/05/16

一、novoproteinDNAMarker特點：每個條帶均為單獨定量制備可以用于DNA段大小和濃度的判斷帶型清晰明亮、條帶大小準確，覆蓋范圍廣（100bp-10kb）明暗條帶優化比例，條帶更美觀內含上樣緩沖液和指示染料可直接上樣、快捷方便添加了特定穩定劑，穩定性高，于-20℃可保存兩年以上適用于TAE和TBE緩沖體系可以任選條帶定制DIYDNAMarker價格優勢明顯二、如何選擇novoproteinDNAMarker如圖為novoprotein在售的18種DNAMarker，可以根據您的目的

*Z易懂的流式細胞實驗設計指南2018/05/08

流式細胞術是非常讓人著迷的實驗。在眾多醫學研究手段里，如果說弱水三千只取一瓢的話，那我會選流式細胞術。從我個人感受來講，流式細胞術高速客觀，具有統計學意義，能夠處理復雜樣本并同時獲取多種參數，zuizui關鍵的是它性能可靠，可重復性非常好。雖然也存在一些局限，但流式細胞術比起傳統的細胞生物學研究手段來講*可以獲得「獨孤求敗」的桂冠了；如果算上共聚焦和膜片鉗，當真可以算拉動現代細胞生物學的「三駕馬車」了。雖然介紹流式細胞術的入門文章很多，很多同學也對流式細胞術耳濡目染已久，看師兄師姐做過無數，可真

即用型免疫組化試劑盒操作步驟2018/05/07

即用型免疫組化試劑盒操作步驟如下，歡迎新老客戶我公司SP免疫組化檢測試劑盒(兔)即用型SP(Streptavidin-Peroxidase)免疫組化檢測試劑盒是利用LAB-SA第二代技術生產的免疫組化檢測試劑，zui大特點是高靈敏度，低倍景染色，直接滴加，操作方便，孵育時間短，適用于冷凍切片、石蠟切片及固定的細胞涂片。可用于檢測兔來源的一抗SP試劑盒內容：無色試劑：內源性過氧化物酶阻斷劑試劑A：封閉用正常山羊血清工作液試劑B：生物素標記二抗工作液：生物素標記羊抗兔IgG試劑C：辣根酶標記鏈酶卵白

蛋白質免疫印跡（Western Blot，WB ）2018/04/24

實驗材料蛋白質樣品試劑、試劑盒裂解液PBSG250考馬斯亮藍溶液NaClSDS上樣緩沖液電泳緩沖液轉移緩沖液麗春紅染液封閉液TBSTTBS洗脫抗體緩沖液顯影液定影液抗體化學發光試劑儀器、耗材高壓鍋玻璃勻漿器高速離心機分光光度儀-20℃低溫冰箱垂直板電泳轉移裝置恒溫水浴搖床多用脫色搖床實驗步驟一、操作步驟：1.蛋白樣品制備（1）單層貼壁細胞總蛋白的提取：①倒掉培養液，并將瓶倒扣在吸水紙上使吸水紙吸干培養液（或將瓶直立放置一會兒使殘余培養液流到瓶底然后再用移液器將其吸走）。②每瓶細胞加3ml4℃預冷