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鹽溶液配制2018/09/19

AcO----partone---(AcO)2Ca1;1.5MAcOK1;2;3;4;5;6;7;8M(AcO)2Mg1MAcONa1;2;3;4MpHofAcK/NasolutionsAcONH41;2;3;4MCO3-K2CO31;2;3;4;5;6MKHCO31MNa2CO31;2MNaHCO31M(NH4)2CO31;2;3;4;5MBr-KBr1;2;3;4;4.5MNaBr1;2;3;4;5.5MCl-CaCl21;2;3;4;5MCoCl21;1.5MCsCl1;2;3;4;5;6

一種提高單克隆抗體產量的簡易方法2018/09/13

近年來單克隆抗體已廣泛應用于基礎理論與臨床應用研究［1］。如何制備質量好產量高的單克隆抗體是當前各有關實驗室研究的重要問題，通常用于生產單克隆抗體的方法有兩種：①利用純系小鼠生產免疫腹水，該法的優點是產量和效價高，但純化困難，價格昂貴，生產周期長；②雜交瘤細胞常規體外培養法，此法雖然產量不價低，但不含正常小鼠免疫球蛋白，較易純化且成本低，但此法若需大量生產則需特殊設備［2］。近有人報道用雜交瘤細胞培養也可提高單克隆抗體的產量且方法簡便［3］。經我們對3株抗人衰變加速因子（Decay-Accele

單克隆抗體細胞融合2018/09/13

（一）融合劑細胞融合的方法有物理法，如電融合、激光融合，化學融合法和生物融合法，如仙臺病毒，此處例舉化學融合法中的一種即聚乙二醇融合法。聚乙二醇（PEG），在分子量為200～700時，呈無色、無臭的粘稠狀液體，分子量大于1000時，呈乳白色蠟狀固體，能溶于水、乙醇及其他許多有機溶劑，對熱穩定，與許多化學藥品不起作用。用作細胞融合劑的聚乙二醇一般選用分子量為4000者，常用濃度為50％，pH8.0～pH8.2（用10％NaHCO3調整），分子量小的PEG，融合效應差，又有毒性，分子量過大，則粘性太

細胞瞬時轉染2018/09/13

1.1細胞瞬時轉染原理：通過脂質體介導轉染法及電穿孔等基因轉染技術，將靶基因導入細胞，一般在轉染后48小時左右，靶基因即可在細胞內表達。根據不同的實驗目的，48小時后即可進行靶基因表達的檢測等實驗。應用：觀察目的基因及其表達蛋白在某種細胞中的功能（短時間即可進行觀察，但效應會很快丟失）一般流程：1）細胞接種：轉染實驗前天接種細胞，各種細胞的平板密度依據各種細胞的生長率和細胞形狀而定。進行轉染當天細胞密度應達到60%~80%覆蓋2）細胞轉染（脂質體、電穿孔、FuGENE6等）3）48小時以后鑒定目

免疫細胞化學與圖像分析2018/09/12

在細胞生物學中，一個常見的問題是如何獲取與細胞功能相關的各種定量測量信息。在免疫細胞化學中也存在同樣的問題。制作免疫細胞化學標本環節較多，只要有一個環節失誤就會影響實驗結果，除了需要精制的藥品外，還需要熟練的技術。那么，做成了理想的標本后，如何進行觀察，才能獲得盡量多的的各種定量信息，而且使這些信息能較客觀的反映出來，這就是本章的編寫目的。一、定量分析的重要性目前有許多研究免疫細胞化學的文章，是做定性和定位研究的。如有文獻中提到，P物質在腦組織中存在于30處以上，這只是解決了定性定位問題，這些部

免疫沉淀2018/09/12

疫沉淀是利用特異性抗體識別并分離抗原的方法。材料：上樣buffer的配方(用前現配):2ul1.25MTris-HCL,pH6.835uldistilledwater2.5ul2-mercaptoethanol12.5ul10%SDS10ul80%glycerol2ulbromphenolblueTNEbuffer:10mMTris-HClpH8.010mMNaCl0.5mMEDTA方法：1．用含有1%NP40的緩沖液重懸細胞，充分振蕩。2．在冰上孵育30分鐘或37℃孵育10—15分鐘3．轉入e

蛋白定量技術2018/09/11

（一）雙縮脲測定法1．原理蛋白質中的肽鍵有雙縮脲反應，在堿性溶液中與二價銅離子形成藍紫色的絡合物，在一定的范圍內，顏色的深淺與蛋白質的含量成正比。此法特異性強，游離的氨基酸、小肽和核酸均不產生這種反應，但此法不夠敏感，僅能測出毫克水平。2．試劑配制硫酸銅（CuSO4·5H2O）1.50g酒石酸鉀鈉5.00gH2O500.0ml10％氫氧化鈉（不含硫酸鈉）300mlH2O加至1000ml此溶液可長期保存，如產生暗紅色沉淀，則應廢棄重配。3．標準曲線的制備⑴準確稱取牛血清白蛋白1.0g（必要時須首先

七葉皂苷D產品分析證書2018/09/10

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厭氧菌的培養2018/09/07

厭氧菌在有氧的情況下不能生長。要培養厭氧菌，必須創造一個無氧的環境。通常用培養基中加入還原劑，或用物理、化學方法去除環境中的游離氧，以降低氧化還原電勢。如皰肉培養基、硫基乙酸鈉培養基，牛心腦浸液培養基等。常用的厭氧培養方法有許多，可根據實際情況選用。1．厭氧缸法接種好標本的平板或液體培養基試管，可放入厭氧缸內培養，厭氧缸是普通的干燥缸，用物理化學的方法使缸內造成厭氧環境，從而將厭氧菌培養出來。2．厭氧袋（Bio-bag）即在塑料袋內造成厭氧環境來培養厭氧菌。塑料袋透明而不透氣，內裝氣體發生管（有

純干貨：IHC，WB 常見問題與結果解析2018/09/06

免疫組化結果常見問題分析(一)結果陰性的原因1.抗體濃度和質量問題以及抗體來源選擇錯誤；2.抗原修復不全，換修復液或加強修復；3.組織切片本身這種抗原含量低，設陽性對照片；4.血清封閉時間過長；DAB孵育時間過短；6.細胞通透不全，抗體未能充分進入胞內參與反應。(二)非特異性染色的原因（著色一片黃/背景深）1.抗體孵育時間過長，抗體濃度；2.多抗易出現非特異性，可選擇單抗；3.內源性過氧化物酶和生物素滅活不夠；4.非特異性組分與抗體結合，延長血清封閉時間；5.DAB孵育時間過長或濃度過高；6.P

腺相關病毒（AAV）在動物實驗中的應用2018/09/03

腺相關病毒屬于微小病毒科(parvovirus)，為無包膜的單鏈線狀DNA病毒，基因組大小約4.7kb。利用腺相關病毒可以將外源基因轉入動物組織和細胞中，具有安全性高、免疫原性低、宿主范圍廣、表達穩定等多種優點，廣泛應用于動物體內研究。腺相關病毒血清型眾多（12種），不同血清型對不同組織親和性不同，因此在具體科學研究中，以下問題往往困擾著廣大科研工作者：選擇何種血清型？如何注射？注射多少病毒？注射部位如何選擇？注射多久檢測？本文就常見的注射部位（大腦、視網膜、肝臟、心臟和動脈、肺臟、腎臟、肌肉、

PCR污染與對策2018/08/30

PCR反應的大特點是具有較大擴增能力與*的靈敏性，但令人頭痛的問題是易污染，極其微量的污染即可造成假陽性的產生.污染原因(一)標本間交叉污染:標本污染主要有收集標本的容器被污染，或標本放置時，由于密封不嚴溢于容器外，或容器外粘有標本而造成相互間交叉污染;標本核酸模板在提取過程中，由于吸樣槍污染導致標本間污染;有些微生物標本尤其是病毒可隨氣溶膠或形成氣溶膠而擴散，導致彼此間的污染.(二)PCR試劑的污染:主要是由于在PCR試劑配制過程中，由于加樣槍、容器、雙蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染.(三

膜蛋白研究的整體解決方案2018/08/30

提起膜蛋白，浮現在廣大從事蛋白研究的科研工作者腦海中的是兩點：1.膜蛋白功能的重要性。2.膜蛋白研究的困難性。*，膜蛋白在細胞間接觸、表面識別、信號轉導、酶活性和運輸方面都扮演著重要的角色。由于它們功能多樣，也就成為理想的藥物靶點。然而，膜蛋白的生化和結構研究一直都很緩慢。ProteinDatabase的統計數據表明，在成功解析出三維結構的蛋白中，膜蛋白只占1%，這與膜蛋白占總蛋白的1/3的總量的差別巨大。由此也可以看出膜蛋白研究確實困難重重。圖1.利用QIAgenes優化序列，昆蟲細胞體外進行

小鼠尿微量白蛋白（ALB）酶聯免疫分析（ELISA）2018/08/28

小鼠尿微量白蛋白(ALB）酶聯免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于測定小鼠血清，血漿,相關液體樣本尿微量白蛋白(ALB）含量。實驗原理：本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠尿微量蛋白(ALB)水平。用純化的小鼠尿微量蛋白(ALB)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入尿微量蛋白(ALB)，再與HRP標記的ALB抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終

SDS-PAGE測定蛋白質分子量及蛋白質的純度鑒定2018/08/28

一、實驗目的與原理蛋白質在聚丙烯酰胺凝膠中電泳時，它的遷移取決于它所帶電荷以及分子大小和形狀等因素。1967年Shapiro等人發現，如果在聚丙烯酰胺系統中加入陰離子去污劑十二烷基磺酸鈉（SDS），大多數蛋白質能與SDS按一定比例結合，即每克蛋白質結合1.4g的SDS－復合物都帶上相同密度的負電荷，它的量大大超過了蛋白質分子原有的電荷量，因而消除了蛋白質原有的電荷差別，使蛋白質分子電泳的遷移率主要取決于本身的分子量，而與蛋白質所帶的電荷無關，在一定條件下，蛋白質的分子量的對數與電泳遷移率間呈負相

凝膠層析法脫鹽和分離蛋白質2018/08/27

（一）原理凡鹽析所獲得的粗制蛋白質（鹽析得到的IgG）中均含有硫酸銨等鹽類，這類將影響以后的純化，所以純化前均應除去，此過程稱為“脫鹽”（desalthing）。脫鹽常用透析法和凝膠過濾法，這兩種方法各有利弊。前者的優點是透析后析品終體積較小，但所需時間較長，且鹽不易除盡；凝膠過濾法則能將鹽除盡，所需時間也短，但其凝膠過濾后樣品體積較大。所以，要根據具體情況選擇使用。前實驗中樣品體積較小，凝膠達濾后樣品體積不會太增加，所以選用凝膠過濾法。（二）試劑與器材（1）SephadexG-25。（2）0.

大鼠表皮生長因子（EGF）酶聯免疫分析（ELISA）2018/08/24

大鼠表皮生長因子(EGF)酶聯免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于測定大鼠血清，血漿及相關液體樣本中表皮生長因子(EGF)的含量。實驗原理：本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠表皮生長因子(EGF)水平。用純化的大鼠表皮生長因子(EGF)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入表皮生長因子(EGF)再與HRP標記抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終

雜交瘤細胞和重組抗體2018/08/24

概述在過去的二十五年里,利用雜交瘤細胞生產了成千上萬的鼠單克隆抗體.人們用同樣的技術從轉基因鼠中克隆人類的抗體,并設計了全長型抗體和重組片段,它們可以被用于多種診斷和治療.而且如果他們能在哺乳動物細胞,牛奶及植物中表達,就可以大量獲得.一個世紀以前,PaulEhrlich提出了的側鏈理論來解釋抗原抗體的相互作用.他不久又鑄造了一個虛構的短語"魔彈"來形容抗體對準及中和抗原.七十五年以后GeorgesKhlerａndCésarMilstein發明了單克隆抗體技術,因此為細胞生物學和臨床診斷學的巨大

狂犬病病毒實時熒光RT-PCR檢測試劑盒說明書2018/08/24

狂犬病病毒實時熒光RT-PCR檢測試劑盒說明書如需更詳細說明書，請聯系雅吉生物用途本試劑盒采用實時熒光RT-PCR方法用于動物狂犬病疑似腦組織、唾液樣品中狂犬病病毒RNA的檢測。原理利用離心柱內硅基質膜提取樣品總RNA，在反轉錄酶的作用下，以RNA為模板，以引物為起點合成與RNA模板互補的cDNA鏈。在熱啟動Taq酶的作用下，經高溫變性、中溫退火及延伸的循環，使特異DNA片段的拷貝數放大一倍，經熒光素標記的探針與擴增的DNA雜交，利用Taq聚合酶的5'→3'外切活性，使熒光探針的報告基團與淬滅基

非洲豬瘟病毒PCR檢測試劑盒2018/08/24

非洲豬瘟病毒PCR檢測試劑盒如需更詳細說明書請聯系我公司AfricanSwineFeverVirusPCRKit使用手冊V1.2產品及特點非洲豬瘟(Africanswinefever,ASF)是由非洲豬瘟病毒(Africanswinefevervirus,ASFV)引起豬的一種急性、熱性、高度接觸傳染性疾病，病死率高達100%,是我國一類動物疫病和世界動物衛生組織規定的必須報告的動物疫病，受到世界各國的高度重視。因此ASFV的快速準確鑒定，對該病的預防和檢疫有著重要作用。目前，對于中國這種非AS