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淡天藍鏈霉菌Streptomyces培養2022/03/23

淡天藍鏈霉菌Streptomyces的培養：1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質組成的繁殖材料。菌種分為母種（一級種）、原種（二級種）和栽培種（三級種）三級。工業發酵的有用菌種，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復篩。2、挑選具有某種能力的有用菌種，也稱種子制備，是指菌種在一定條件下，經過擴大培養成為具有一定數量和質量的純菌種的制備過程。以作接入發酵罐中進一步擴大菌體量及合成產物之用。3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備（見圖）菌種制備，其中(1)～(4)為孢子制備過程。4、保存在沙土管或冷凍管中的

細胞凍存操作步驟2022/03/15

細胞凍存操作步驟：1、預先配制凍存液：凍存液比例多種，根據細胞的特性進行調整凍存液的比例：5%—10%DMSO+20%—90%血清+0%—70%基礎培養液；2、取對數生長期的細胞，去除舊培養液，用PBS清洗1-2次；去掉培養瓶里的殘余血清；3、加入適量胰酶（濃度一般為0.25%），使胰酶覆蓋整個瓶，放入培養箱消化；4、細胞消化0.5-2min（具體時間根據鏡下形態判斷），顯微鏡下觀察細胞，細胞胞質回縮，細胞間不再連接成片，此時加入*培養基終止消化；5、用巴氏吸管輕輕吹打細胞，形成細胞懸液，將細胞

?抗體的特異性免疫反應有幾種2022/03/07

抗體是由各種抗原激活淋巴細胞，淋巴細胞進一步分化成熟為漿細胞而產生的，是機體的特異性免疫反應，抗原可以包括以下幾種：第一、各種病原微生物感染之后，微生物的表面的蛋白可以作為抗原激活體內的淋巴細胞，產生特異性的免疫應答產生抗體；第二、可以是致敏原，這種致敏原進入到體內之后可以產生抗體IgE，等到再次接觸過敏原的時候可以引起過敏反應，即變tai反應；第三、先天存在的，比如ABO血型的抗原，所以針對ABO血型的抗體也是先天存在的，一般是IgM抗體，對于病原微生物進入到體內之后可以產生兩種抗體，一種是I

簡介蛋白定量主要的兩種方法2022/03/01

蛋白定量的方法有很多種，應用較多的主要有兩種：BCA蛋白定量檢測法和Bradford蛋白定量檢測法，市售的蛋白定量試劑盒也多基于上述兩種檢測方法而開發的。兩種方法均需配制蛋白標準品，蛋白與定量試劑經過一定時間的反應（BCA法反應為37℃、20-30min，Bradford法反應一般為37℃，5min），酶標儀讀取樣品的OD值，繪制的蛋白標準曲線，依據標準曲線計算WB蛋白的濃度。兩種檢測方法相比BCA法，Bradford法不僅節省反應時間，也無需配置反應試劑，簡單、快速、好用，推薦Bradford

細胞因子根據主要功能分類2022/02/22

1.白細胞介素(interleukin,IL)1979年開始命名。由淋巴細胞、單核細胞或其它非單個核細胞產生的細胞因子，在細胞間相互作用、免疫調節、造血以及炎癥過程中起重要調節作用，凡命名的白細胞介素的cDNA基因克隆和表達均已成功，已報道有三十余種(IL-1―IL-38)。2.集落刺激因子(colonystimulatingfactor,CSF)根據不同細胞因子刺激造血干細胞或分化不同階段的造血細胞在半固體培養基中形成不同的細胞集落，分別命名為G(粒細胞)-CSF、M(巨噬細胞)-CSF、GM

單克隆抗體的制備凍存及純化2022/02/15

單克隆抗體的制備和凍存：篩選出的陽性細胞株應及早進行抗體制備，因為融合細胞隨培養時間延長，發生污染、染包體丟失和細胞死亡的機率增加。抗體制備有兩種方法。一是增量培養法，即將雜交瘤細胞在體外培養，在培養液中分離單克隆抗體。該法需用特殊的儀器設備，一般應用無血清培養基，以利于單克隆抗體的濃縮和純化。*普遍采用的是小鼠腹腔接種法。選用BALB/c小鼠或其親代小鼠，先用降植烷或液體石蠟行小鼠腹腔注射，一周后將雜交瘤細胞接種到小鼠腹腔中去。通常在接種一周后即有明顯的腹水產生，每只小鼠可收集5～10ml的腹

穩定細胞株篩選2022/01/27

方法一：先把質粒整合到染色體上后，用相應的質粒DNA中的抗性標志來篩選該細胞系，單克隆篩選穩定細胞株。第一步：篩選濃度測定，以10~14天細胞全部死亡的抗生素濃度為篩選濃度；第二步：進行細胞接種，轉染實驗前天接種細胞，各種細胞的平板密度依據各種細胞的生長率和細胞形狀而定。進行轉染當天細胞密度應達到60%~80%覆蓋；第三步：進行細胞轉染第四步：利用質粒上含有的抗性選擇進行篩選，并鑒定篩選結果。方法二：應用逆轉錄病毒，慢病毒轉染，篩選穩定細胞株。慢病毒可以攜帶外源基因隨機整合進基因組。轉染得到穩定

冷凍切片實驗操作步驟及注意點2022/01/20

操作步驟：1、取出組織支承器，放平擺好組織，周邊滴上包埋劑，速放于冷凍臺上冰凍，用吸熱器壓住組織，至包埋劑與組織凍結成白色冰體即可切片（1~3分種）。2、將冷凍好的組織塊，夾緊于切片機持承器上，啟動粗進退鍵，轉動旋鈕，將組織修平。3、調好欲切的厚度，根據不同的組織而定，原則上是細胞密集的薄切，纖維多細胞稀的可稍為厚切，一般在5～10μm間。4、調好防卷板。制作冰凍切片，關鍵在于防卷板的調節上，這就要求操作者要細心，準確地將其調較好，調校至適當的位置。切片時，以切出完整、平滑的切片為準。切好的組織

小鼠鈣衛蛋白elisa試劑盒試劑配制過程2022/01/11

1、標準品(1)從試劑盒中取出支標準品，于6000-10000rpm離心30。用1ml樣本稀釋液溶解，并用吸頭對準凍存管底部反復吸打5次以助溶解，充分混勻得到標準品S7，放置備用。(2)取7個1.5ml離心管(S0-S6)依次排列，各加入250μl樣本稀釋液。吸取250μl標準品S7到*個離心管中(S6)，輕輕吹打混勻。從S6中吸取250μl到第二個EP管中(S5)，輕輕吹打混勻。以此類推進行標準品的倍比稀釋。S0為樣本稀釋液。2、洗液工作液濃洗滌液按1:25倍用去離子水進行稀釋。例如用量筒量取

小鼠細胞培養方法有哪些2022/01/05

小鼠細胞培養方法：1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗-2次；②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；③-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；④將細胞懸液000RPM左右條件下離心4min，棄上清；⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；⑥懸浮細胞直接離心

逆轉錄RT-PCR具體操作步驟2021/12/27

逆轉錄RT-PCR原理:提取組織或細胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用Oligo(dT)或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA。再以cDNA為模板進行PCR擴增，而獲得目的基因或檢測基因表達。RT-PCR使RNA檢測的靈敏性提高了幾個數量級，使一些極為微量RNA樣品分析成為可能。逆轉錄RT-PCR操作步驟：一、RNA逆轉錄cDNA（反應體系要20ul）依次加入1、Oligo（dT）加入1ul。2、RNA（體積即上一步驟計算出來的）3、剩下的用無Rnase水補齊共12ul65℃水浴5m

為什么溫度是微生物生長最重要影響因素2021/12/22

微生物與所處的環境之間具有復雜的相互影響和相互作用:一方面,各種各樣的環境因素對微生物的生長和繁殖有影響,另一方面,微生物生長繁殖也會影響和改變環境.研究環境因素與微生物之間的關系,可以通過控制環境條件來利用微生物有益的一面,同時防止它有害的一面。溫度是影響微生物生長的最重要因素之一。溫度對微生物的影響具體表現在：1、影響酶活性，溫度變化影響酶促反應速率，最終影響細胞合成。2、影響細胞膜的流動性，溫度高，流動性大，有利于物質的運輸，溫度低，流動性降低，不利于物質運輸，因此，溫度3、變化影響營養物

介紹細胞因子受體相關常識2021/12/15

細胞因子通過結合細胞表面相應的細胞因子受體而發揮生物學作用。細胞因子和其受體的結合是細胞因子介導的細胞信號轉導的啟動刺激。已知的細胞因子受體絕大多數是跨膜蛋白，由胞膜外區、跨膜區和胞漿區組成。細胞因子與其受體結合后啟動復雜的細胞內分子間的相互作用，zui終引起細胞基因轉錄的變化，這一過程稱為細胞的信號轉導。細胞因子和其受體的結合是細胞因子介導的細胞信號轉導的啟動刺激。已知的細胞因子受體絕大多數是跨膜蛋白，由胞膜外區、跨膜區和胞漿區組成。胞膜外區為識別結合細胞因子的部位，胞漿區啟動受體激活后的信號

有關ELISA試劑盒使用操作方法2021/12/09

在現在的ELISA商品試劑盒中，必然有使用微量加樣器加入樣本的步驟。注意的關鍵點是：加樣不可太快，要避免加在孔壁上部，不可濺出和產生氣泡。加樣太快，無法保證微量加樣的準確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區，易導致非特異吸附。濺出會對鄰近孔產生污染。出現氣泡則反應液界面有差異。所以，有時候一份標本用相同的elisa試劑盒這次測定為陽性，下次測定為陰性，往往就是上述加樣及試劑的錯誤所致。ELISA試劑盒操作方法：各種類型ELISA測定時一般需經過這些步驟：固相包被→加待測樣品→溫育→洗滌+加酶標物→

簡述ELISA基本原理2021/11/29

酶聯免疫吸附實驗(ELISA)即將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使酶標記的抗原抗體反應在固相表面進行的技術。該技術可用于檢測大分子抗原和特異性抗體等，具有快速、靈敏、簡便、載體易于標準化等優點。基本原理它采用抗原與抗體的特異反應將待測物與酶連接，然后通過酶與底物產生顏色反應，用于定量測定。測定的對象可以是抗體也可以是抗原。在這種測定方法中有3種必要的試劑：1、固相的抗原或抗體（免疫吸附劑）2、酶標記的抗原或抗體（標記物）3、酶作用的底物（顯色劑）測量時，抗原（抗體）先結合在固相載體上，但仍

了解細胞培養中關鍵步驟2021/11/24

1、準備工作準備工作的內容包括器皿的清洗、干燥與消毒，培養基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無菌室或超凈臺的清潔與消毒，培養箱及其他儀器的檢查與調試等。2、取材在無菌環境下從機體取出某種組織細胞（視實驗目的而定），經過一定的處理（如消化分散細胞、分離等）后接入培養器血中，這一過程稱為取材。如是細胞株的擴大培養則無取材這一過程。機體取出的組織細胞的培養稱為原代培養。理論上講各種動物和人體內的所有組織都可以用于培養，實際上幼體組織（尤其是胚胎組織）比成年個體的組織容易培養，分化程度低的組織比分化高的容

讓細胞活躍的六個實用對策2021/11/17

細胞，生物學名詞，生物體的結構和功能的基本單位。一般具有細胞核、細胞質和細胞膜。植物細胞的細胞膜外還有細胞壁。體形極微，在顯微鏡下始能窺見。形狀多種多樣，主要由細胞核與細胞質構成，表面有薄膜。動植物細胞結構大致相同。植物細胞質膜外有細胞壁，細胞壁中常有質體，動物細胞質中常有中心體，而高等植物細胞中則無。細胞有運動、營養和繁殖等機能。細胞是許多生物學實驗的主角。如果細胞心情不好，那么實驗的結果也不會好到哪兒去。如何讓細胞快樂？下面就仔細了解一下吧!1.確保所有實驗室材料都無菌交叉污染是細胞培養的大

詳述標準溶液的配制步驟2021/11/08

標準溶液的定義：標準溶液指的是具有準確已知濃度的試劑溶液，在滴定分析中常用滴定劑。在其他的分析方法中用標準溶液繪制工作曲線或作計算標準。標準溶液的濃度標定：標準溶液的濃度標定因配置溶液不同而有所不同。標準溶液的配制方法有兩種：1、直接配制法在分析天平上準確稱取一定量已干燥的基準物溶于水后，轉入已校正的容量瓶中用水稀釋至刻度，搖勻，即可算出其準確濃度。2、標定法很多物質不符合基準物生物條件，不能直接配制標準溶液。一般先將這些物質配成近似所需濃度溶液，再用基準物測定其準確濃度。標定的方法有直接標定和

選擇合適的抗體的實用方法2021/11/03

抗體(英語:antibody)，抗體是一類能與抗原特異性結合的免疫球蛋白。(免疫球蛋白不僅僅只是抗體)是一種由漿細胞(效應B細胞)分泌，被免疫系統用來鑒別與中和外來物質如細菌、病毒等的大型Y形蛋白質，僅被發現存在于脊椎動物的血液等體液中，及其B細胞的細胞膜表面。一、一抗的選擇檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇，為縮小抗體的選擇范圍選中合適的抗體，需要考慮的因素：1.實驗應用的類型一般抗體說明書都列出該抗體經試驗驗證過適用于何種分析類型，如：可以應用于WB/IHC/ICC/ELISA分析等

不同實驗對抗體有什么要求2021/10/26

科研工作離不開抗體，WB、IP、IHC、IF、ChIP和FC都需要用到抗體，那么這幾種實驗技術都需要什么樣的抗體呢？1.WBWB的蛋白經過加熱變性之后都變成線性的結構。因此*好的抗體是采用非常特異序列的人工合成多肽的方法來做實驗，結果也非常特異。2.IP/CHIP我們用抗體去結合生理狀態下的蛋白質，因此IP的抗體最好使用純化的天然蛋白制作的抗體來做，也可以用純化的重組蛋白的抗體。最好不要用人工合成多肽制作的抗體，因為這種抗體識別的位點可能被深深地藏在了蛋白的內心深處。CHIP和IP沒有太大的區別