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EB 病毒轉化成淋巴細胞2023/01/11

材料與儀器全血刀豆凝集素ARPMI生長培養基離心管步驟1.混合10ml全血和10mlRPMI生長培養基。生長培養基（RPMI1640800ml，FBS200ml，2mmol/L-谷氨酰胺，5μg/ml兩性霉素，50μg/ml慶大霉素）2.取15ml無菌離心管，加3mlHisto-paque1077（Sigma），在其上加4ml稀釋血，分離淋巴細胞。3.室溫300g離心30分鐘，棄上層清亮血漿。4.收集不透明淋巴細胞層，細胞懸液倒入50ml無菌離心管。5.20mlRPMI1640生長培養基洗兩次，

細胞復蘇的小細節操作讓您的細胞嗨起來2023/01/10

假期太快結束，又到了復蘇細胞開始實驗的環節了，以下是整理的一些復蘇細胞的注意事項：1.細胞儲存在液氮中，溫度達-196℃，理論上儲存時間是無限的。只要一直在液氮，凍存沒有問題，那么復蘇也不會出現很大的問題，不存在有效期限，而且可能發生的是，細胞保存的時間越久，可能代次越靠前哦，細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融，復蘇一定越快越好，實驗證明這樣可以最大限度的保存細胞活力。2.取細胞時應做好防護措施，帶好防凍手套，護目鏡。細胞凍存管可能漏入液氮，解凍時凍存管中的氣溫急劇上升，可導致爆炸。3.必須在1

3D 細胞培養具體操作2023/01/10

體外三維細胞建模和成像是候選分子毒性評估的一個有價值的早期步驟，3D細胞培養很大程度上可檢測臨床前藥物開發工作流程，包括在細胞、組織、器官和整個有機體的迭代更高生物水平上的毒性評估。在這些層次上建模和成像的能力是分子評估和發展的強大工具。3D細胞培養中的單個細胞提供了關于分子亞細胞對一般細胞功能的影響的數據，如細胞生長速度。3D細胞培養也用于評估特定細胞類型的毒性，提供組織和器官功能的數據。3D細胞培養允許細胞生長，培養物向各個方向擴展，從而模擬自然的微結構。這種類型的培養提供了對分子對細胞間相

細胞活性測定方法大全2023/01/10

代謝增殖測定MTT檢測法活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶，能使額外添加的MTT還原為不溶于水的藍紫色結晶甲瓚（Formazan），并沉積在細胞中，死細胞則無此現象。接著用二甲基亞砜（DMSO）溶解沉積在細胞中的甲瓚后，可利用酶標儀490nm波長測光吸收值，依據吸光值（OD值）計算出活細胞數量。在一定細胞數范圍內，吸光值與細胞活性成正比。△圖例XTT檢測法與MTT原理相似，皆是利用添加物與活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶反應，并利用酶標儀測定產物光吸收值；不同于MTT法的是，XTT法還原產物是水溶性的橙黃

血清沉淀知多少2023/01/10

血清沉淀是什么？血清中經常會出現肉眼可見的沉淀，其成分有多種類型，產生的原因有很多，主要有纖維蛋白、磷酸鈣還有一些其它成分。1.纖維蛋白（Fibrin）血清中肉眼可見的沉淀物大多屬于這一類型。由于在生產過程中，血清采集、過濾（3次0.1μm過濾）和灌裝處理都是在低溫條件下快速完成,此時血清中纖維蛋白原（Fibrinogen）處于溶解狀態。但在解凍之后,血清中纖維蛋白原往往會發生凝集，形成肉眼可見的沉淀。2.磷酸鈣（CalciumPhosphate）這是一種常見的沉淀成分，通常會造成血清出現云霧狀

T淋巴細胞轉化實驗2023/01/10

原理T細胞在體外培養時，受到非特異性有絲分裂原（如PHA、ConA）刺激后，可出現細胞體積增大，代謝旺盛，蛋白和核酸合成增加,即向淋巴母細胞轉化。淋巴細胞轉化率的高低可以反映機體的細胞免疫水平，因此可作為測定機體免疫功能的指標之一。淋巴細胞轉化試驗有形態計數法、MTT法和同位素法三種。MTT法即四甲基偶氮唑鹽微量酶反應比色法。MTT是一種噻唑鹽，化學名3-（4，5-二甲基-2-噻唑）-2，5-二苯基溴化四唑，水溶液為黃橙色。小鼠脾細胞受到ConA作用后發生增殖活化，其胞內線粒體琥珀酸脫氫酶活性相

消除微生物污染2023/01/06

原理通過沖洗單層培養物或通過離心重懸非貼壁細胞，以高濃度抗生素清洗培養物數次，然后將培養物傳代，用加抗生素的培養基傳三次，再用不加抗生素的培養基傳三次，每次傳代后都要檢測是否污染。材料與儀器DBSS高濃度抗生素培養液用于傳代培養的材料帶有40×或60×物鏡的相差顯微鏡用于支原體染色的材料步驟1.仔細收集污染培養液，如有可能，應測試該有機體對一系列抗生素的敏感性，如果做不到，則應對培養液進行高壓滅菌或加入次氯酸鹽。2.用DBSS沖洗細胞（每一次沖洗可使污染物濃度減少兩個對數級，除非污染物黏貼在細胞

分離人臍靜脈內皮細胞2023/01/06

材料與儀器D-PBSA胰蛋白酶EDTA人臍帶膠原蛋內酶H冷的新生小牛血Hank平衡鹽溶液HBSSPSG70%乙醇HUVRC生長培養液培養瓶手術刀和22號刀片手術針20ml注射器鱷魚夾動脈夾尖頭剪棉紙鋁箔塑料薄膜或莎綸封皮軟木板很堅韌的線Luer接合管步驟內皮細胞的分離1.用鋁箔覆蓋軟木板。2.將棉紙鋪在鋁箔上面，然后用70%乙醇浸泡。3.擠出臍帶中的血液。4.切除臍帶一端2cm或2cm以上，包括動脈夾痕跡處。5.將Luer接合管外套插入靜脈。6.用針將臍帶釘在軟木板上，但注意勿穿經血管腔。7.用

小鼠胚胎MEF細胞的提取2023/01/06

小鼠胚胎MEF細胞的提取步驟：1.將新鮮收獲的胚胎放入10厘米的細胞培養皿中2.用PBSA覆蓋胚胎，取出胎盤和其他母體組織3.切掉頭頂（眼睛及以上），取出內臟4.保存頭部/卵黃囊進行DNA分離以進行基因分型檢測5.將胚胎體置于單獨的10厘米板中6.加入1mL胰蛋白酶，用刀片切碎成1mm的小碎片7.用酒精燈火焰對樣品之間的刀片進行消毒8.將皿置于37°C培養箱中30-45分鐘（傾斜，使胰蛋白酶覆蓋細胞）9.通過在每口井中添加4mLMEF培養基（通常DMEM+10%FBS+1%G/A）來抑制typs

從哺乳動物細胞中制備核和細胞質提取物2023/01/06

材料與儀器轉瓶或單層培養的哺乳動物細胞（如HeLa細胞）PBS低滲緩沖液高鹽緩沖液含1.2molLKCl透析緩沖液液氮貝克曼JS4.2轉子或相當的轉子50mL圓錐形刻度聚丙烯離心管（對較小體積的提取物也可用15mL的離心管）Dounce氏玻璃勻漿器（B型研杵）BeckmanJA-20離心轉子或相當的轉子磁性攪拌器或傾斜臺BeckmanJA-20離心轉子或相當的轉子磁性攪拌器或傾斜臺、管型透析膜（14000MWCO）、電導計步驟1a)收集轉瓶培養的細胞：將5×108?10×108細胞置1L的塑料瓶

單層細胞在細胞瓶中的接種2023/01/06

原理單層生長的細胞增殖，融合成片，并長滿細胞瓶表面。有些細胞靠頻繁地換液可維持細胞在平臺期數天至數周；而許多其他細胞系需要胰蛋白酶處理、傳代培養后才能存活下來，用胰蛋酶處理可將細胞從生長物表面分離下來以促進傳代培養。后種細胞系不易呈現出接觸抑制并繼續增殖，達到極限后細胞則從細胞瓶表面脫落,很難再彌散接種。材料與儀器步驟1)下列步驟描述胰蛋白酶處理細胞的過程（見下文“胰蛋白酶處理分離細胞”）2)重懸細胞于培養液中。在此時進行細胞計數嚴好。若記錄傳代次數以識別細胞的生長經歷，可按方便傳代計劃的比例稀

細胞凍存實驗2023/01/05

原理傳統上的細胞凍存（甘油/二甲基亞砜做保護劑）講求的是：慢凍速溶。細胞凍存時向培養基中加入的甘油或二甲基亞砜（DMSO），這兩種物質能提高細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細胞內的水分滲出細胞外，減少細胞內冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。用途細胞保種材料與儀器【實驗材料】細胞、DMSO、0.25%Trypsin-EDTA（或細胞刮刀）、100X雙抗、PBS、胎牛血清、DMEM完-全培養基、75%乙醇、胰酶、異丙醇；【儀器與用品】凍存管、37度恒溫水浴鍋、培養皿（6cm）、細胞

免疫熒光抗體法2023/01/05

原理用人結腸癌細胞為免疫原，免疫小鼠，制得鼠抗人結腸癌細胞表面抗原（Ag）的單克隆抗體IgG（第一抗體），二者可以發生特異性的抗原抗體反應，形成抗原抗體復合物，再加入市售（也可自制）的熒光標記的羊抗鼠IgG抗體（第二抗體），可以與復合物進一步發生抗原抗體反應（二次抗體反應），這樣就可以在光顯微鏡下觀察到這種抗原在結腸癌細胞表面的存在。材料與儀器HeLa細胞1640培養液小牛血清甲醛固定液PBS液體石蠟蓋片載片培養瓶培養皿濾紙鑷子吸管倒置顯微鏡熒光顯微鏡微量加樣器步驟1.將培養瓶中的結腸癌細胞接種

神經膠質細胞培養實驗2023/01/05

材料與儀器大鼠CMF-Hanks液胰蛋白酶DMEMF12水浴鍋培養箱步驟一、原代培養1.選用生后1周的新生大白鼠，用碘酒,酒精棉球消毒，斷頭取其大腦皮層組織。2.解剖顯微鏡下，剝離腦膜，切除大腦髓質部分。3.將大腦皮質在無Ca2+、Mg2+Hanks液(CMF-Hanks液)中剪碎。4.室溫下靜置10min。5.在37℃水浴箱中用0.125%的胰蛋白酶(用CMF-Hanks液配制)消化30min。6.加入少許含20%血清的DMEM/F12(DMEM與F12為1:1)混合培養液(下同)，用吸管稍加

小鼠肝細胞培養實驗2023/01/05

原理直接從生物體內獲取組織細胞進行的首-次培養稱為原代細胞培養。原代培養是建立各種細胞系的第一步，是從事培養工作的人員應熟悉和掌握的最基本的技術。根據培養方法不同分為組織塊培養法和單層細胞培養法。材料與儀器小鼠DMEMDMEM胰酶PBS飯盒紗布小剪子小鑷子大鑷子大燒杯平皿研磨玻片濾網離心管6孔培養板吸管移液管手套微量加樣器步驟一、實驗步驟1.將小鼠斷頸致死，置75%酒精泡2-3秒鐘，取肝臟，置于盛有PBS的平皿中。2.剔除脂肪、結締組織、血液等雜物，轉移到另一個盛有PBS液的平皿中。3.用手術剪

斑馬魚胚胎細胞的培養2023/01/05

原理收集胚胎，除去絨毛膜，用胰蛋白酶分散胚胎細胞，然后在胚胎成纖維細胞飼養層上培養從斑馬魚囊胚和原腸期胚獲得的原代細胞。材料與儀器鏈酶蛋白酶E用D-PBSA配制1%胰蛋白酶和1mmolLEDTA胚胎成纖維細胞飼養層人重組白血病抑制因子LDF基礎培養液LDF原代培養液LDF維持培養液D培養液Holtfreter緩沖液稀漂白劑步驟鱒魚胚胎提取物：(a)收集胚胎（受精后28天的ShastaRainbow或其他鱒魚種系，在10°C條件下飼養，或者受精后3天的斑馬魚，在28°C條件下飼養），在-80°C條

原代細胞怎么永生化2023/01/04

原代細胞都無法擴增幾輪增殖，這被稱為Hayflick極限，因為每一輪的增殖都會縮短端粒。當端粒達到臨界縮短長度時，DNA損傷被觸發，導致細胞衰老，如果你試圖培養一個珍-稀原代細胞群，當心它最終會死亡，可以對細胞進行操縱，以繞過衰老過程并變得不朽，原代細胞永生化就是有這么神奇的事情。自發性永生化細胞最-好-的例子就是癌細胞，它們可能經歷了抵抗衰老的基因變化，并且開始“長生不老”。其實許多癌細胞株也沒有這種變化，事實上，喬治·蓋伊（GeorgeGey）這位科學家創造了第一個永生的、可以說是最著名的細

內皮細胞實驗的新秀來啦2023/01/04

內皮細胞實驗的新秀來啦，HECV人臍靜脈內皮細胞來啦，HECV細胞是不-可-多得的永生化內皮細胞株，代次靠前，一周可以傳4-5次，8-12小時可達到5倍增，遠遠超于HMEC-1細胞株和HUVEC-T1增殖速度和形態，是用來研究內皮功能障礙、血腦屏障實驗及傷口愈合實驗的最-佳-選擇，細胞形態如下：一.細胞鑒定結果：二、使用傷口愈合試驗評估對HECV細胞遷移能力的相同影響:A）在0、6、24和48小時采集多組圖像，以確定細胞在不同條件下的遷移，使用ImageJfree軟件對圖像進行分析B）測量封閉區

收到活細胞怎么處理？2023/01/04

收到細胞后，發現是培養瓶，第一次操作的束手無策，怎么辦？首先我們得弄明白我們得細胞是貼壁細胞還是懸浮細胞或者是半懸浮細胞,不明白的同學可以參考下圖哦：貼壁細胞：SKOV3懸浮細胞：THP-1半懸浮半貼壁:BV-2細胞貼壁細胞請遵守以下準則：細胞收到后，顯微鏡下觀察，有些細胞貼壁比較牢，它不會因為運輸問題有變化，收到后下顯微鏡下觀察細胞的密度，確定無污染，細胞無異常先放培養箱穩定1-2個小時后，按照貼壁細胞消化順序消化：一.貼壁細胞消化順序如下：1.準備工作，胰酶預熱，培養基預熱，PBS預熱10-

怎么使用GSIS方法檢測細胞胰島素分泌2023/01/04

Min6細胞是這次贈送活動中很多客戶選擇的細胞，一共送出去有50多株，隨之而來的就是問胰島素的檢測，很多客戶檢測出來只有低表達。Min6細胞培養需要注意三點：1.細胞易聚團，消化的時間表面上看會非常短暫，大約30秒會全部脫落，脫落后請延長消化時間到2分鐘后，再中和，細胞后期聚團會減少。2.活細胞運輸的時候會漂浮，請收集培養基離心，離心后重新鋪板以完-全培養基剛沒過細胞為準，完-全培養基加太多會導致細胞浮力過大，貼壁不上。3.培養基請一定要加0.05mm的β-Mer以下是我們檢測使用的buffer