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如何培養(yǎng)大鼠平滑肌細(xì)胞？2022/10/24: 一、器械顯微器械：眼科剪一把，直彎眼科鑷各一把，細(xì)結(jié)鑷一把，手術(shù)刀一把，針頭諾干殺老鼠器械：手術(shù)剪一把，大鑷子一把，彎眼科鑷一把，組織鉗一把，50ml燒杯一個(gè)（錫紙包好）另外：10ml離心管兩個(gè)，培養(yǎng)皿兩個(gè)，10ml的瓶子三個(gè)，小濾器兩個(gè)，硅膠板一塊，培養(yǎng)瓶蓋子諾干二、試劑D-HANKS液250ml，雙抗2ml（青霉素16萬(wàn)U/ml鏈霉素15萬(wàn)U/ml），一型膠原酶，木瓜酶，BSA。后三種加上D-HANKS配成1ml的消化液，終濃度皆為1mg/ml。無(wú)血清DMEM和含20％FBS的DMEM三、步

大鼠平滑肌細(xì)胞的貼壁培養(yǎng)方法2022/10/24: 貼壁法：器械顯微器械：眼科剪一把，直彎眼科鑷各一把，細(xì)結(jié)鑷一把，手術(shù)刀一把，針頭諾干殺老鼠器械：手術(shù)剪一把，大鑷子一把，彎眼科鑷一把，組織鉗一把，50ml燒杯一個(gè)（錫紙包好）另外：10ml離心管兩個(gè)，培養(yǎng)皿兩個(gè)，10ml的瓶子三個(gè)，小濾器兩個(gè)，硅膠板一塊，培養(yǎng)瓶蓋子諾干貳。試劑D-HANKS液250ml，雙抗2ml（青霉素16萬(wàn)U/ml鏈霉素15萬(wàn)U/ml）。FBS和含20％FBS的DMEM叁。步驟1．取大鼠，稱重，水合氯醛0。3ml/100g腹腔麻醉2．綁好大鼠，先剪開(kāi)腹腔，剪斷腹部大動(dòng)脈放血

正常大鼠原代主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)方法2022/10/24: PriCells–正常大鼠原代主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)一、實(shí)驗(yàn)試劑1、培養(yǎng)基：PriCellsMedium+10%FBS+1%P/S+PriCellsSupplement2、凍存液：PriCellsMedium+20%FBS+10%DMSO3、洗滌液：1×PBS（pH7.4）+1%P/S4、染色液：0.4%TrypanBlue5、消化液：PriCellsIsolationofPrimaryCellKit6、檢測(cè)試劑：肌動(dòng)蛋白、a-SMA或Desmin抗體，熒光標(biāo)記二抗，4%多聚甲醛二、實(shí)驗(yàn)器械1、培

懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的方法2022/10/20: 材料與儀器凍存HeLaS3細(xì)胞70%乙醇*MEM-10胰酶／EDTA旋轉(zhuǎn)瓶*培養(yǎng)基-525cm2組織培養(yǎng)瓶C02培養(yǎng)箱SorvallH-6000A轉(zhuǎn)子100ml或200ml通氣旋轉(zhuǎn)瓶和帶濾膜的瓶蓋步驟1.將含有凍存HeLaS3細(xì)胞的安瓿放入37℃水浴中解凍。2.用70%乙醇對(duì)安瓿的頂端進(jìn)行消毒，打開(kāi)安瓿，用吸管將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含有5ml*MEM-10培養(yǎng)基的25cm2組織培養(yǎng)瓶中，輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)瓶，使細(xì)胞均勻分布于培養(yǎng)瓶中，放入5%CO2加濕培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。3.將培養(yǎng)基吸出，用0.5ml37℃

如何提高細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率？2022/10/20: 總有一種轉(zhuǎn)染方法適合你一、怎樣提高細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率?有的同學(xué)做了轉(zhuǎn)染，連接目的基因的載體帶熒光，轉(zhuǎn)染后48小時(shí)在熒光顯微鏡下觀察，卻發(fā)現(xiàn)只有約百分之15左右的熒光，問(wèn)該怎么提高轉(zhuǎn)染效率?有沒(méi)有必要接著往下做篩選?還是重新轉(zhuǎn)染一次?1、如果要是做穩(wěn)定篩選的話，15%的轉(zhuǎn)染率應(yīng)該夠了。提高轉(zhuǎn)染效率的話，可以適當(dāng)降低轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞的密度(我試過(guò)60～70%的密度比90%更好一些)，另外還有可能就是細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)，還有在接種后24h內(nèi)進(jìn)行轉(zhuǎn)染。2、轉(zhuǎn)染應(yīng)該在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期內(nèi)進(jìn)行才能保證轉(zhuǎn)染效率，因?yàn)樵摃r(shí)期細(xì)胞生長(zhǎng)

如何提高腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)存活率和生長(zhǎng)率？2022/10/20: 原理根據(jù)人們的經(jīng)驗(yàn)，腫瘤細(xì)胞在體外不易培養(yǎng)，建立能傳代的腫瘤細(xì)胞系更為困難。當(dāng)腫瘤組織或細(xì)胞初代接種培養(yǎng)后，常出現(xiàn)以下幾種情況：1.*無(wú)細(xì)胞游出或移動(dòng)；2.有細(xì)胞移動(dòng)和游出，但無(wú)細(xì)胞增殖，細(xì)胞長(zhǎng)時(shí)間處于停滯狀態(tài)以致難以傳代；3.有細(xì)胞增殖，傳若干代后停止生長(zhǎng)或衰退死亡；4.傳數(shù)代后細(xì)胞增殖緩慢，經(jīng)過(guò)一段停滯期后，才又呈旺盛生長(zhǎng)狀態(tài)，形成穩(wěn)定生長(zhǎng)的腫瘤傳代細(xì)胞系。以上現(xiàn)象說(shuō)明腫瘤細(xì)胞對(duì)體外生存條件有較高的要求，并需經(jīng)過(guò)對(duì)新環(huán)境的適應(yīng)才能生長(zhǎng)，因此欲獲得好的培養(yǎng)效果，不能局限于一般培養(yǎng)法，必須采用一

腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)2022/10/20: 原理腫瘤組織及細(xì)胞在模擬體內(nèi)生長(zhǎng)環(huán)境的條件下、與一般組織細(xì)胞一樣、也能夠生長(zhǎng)發(fā)育乃至繁殖、為研究癌變機(jī)理、抗癌藥檢測(cè)、腫瘤分子生物學(xué)提供大量的實(shí)驗(yàn)材料。材料與儀器腫瘤組織培養(yǎng)液Hanks胰蛋白酶EDTA膠原酶培養(yǎng)瓶培養(yǎng)皿吸管和膠帽眼科剪眼科鑷二氧化碳培養(yǎng)箱超凈工作臺(tái)步驟一、取材人腫瘤細(xì)胞來(lái)自外科手術(shù)或活檢瘤組織。取材部位非常重要，體積較大的腫瘤組織中有退變或壞死區(qū)，取材時(shí)盡量避免用退變組織，要挑選活力較好的部位。癌性轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)或胸腹水是好的培養(yǎng)材料。取材后宜盡快進(jìn)行培養(yǎng)，如因故不能立即培養(yǎng)，可貯

細(xì)胞毒性分析2022/10/20: 細(xì)胞毒性是指由細(xì)胞或化學(xué)物質(zhì)引起的單純細(xì)胞殺傷事件，不依賴于凋亡或壞死的細(xì)胞死亡機(jī)理。常用細(xì)胞毒性檢測(cè)方法有CCK-8法、MTT法、LDH法。1、與MTT法相比：1）CCK-8使用更為方便，無(wú)需洗滌細(xì)胞；2）CCK-8法能快速檢測(cè)；CCK-8法的檢測(cè)線性范圍廣，靈敏度更高；4）CCK-8法的重復(fù)性更好，MTT實(shí)驗(yàn)生成的formazan不是水溶性的，需要使用DMSO等有機(jī)溶劑溶解；CCK-8法產(chǎn)生的formazan是水溶性的，既省去了溶解步驟，又可以減少該操作步驟帶來(lái)的誤差；5）CCK-8法對(duì)細(xì)胞

細(xì)胞增殖分析（CCK-8 法）2022/10/18: CellCountingKit-8（簡(jiǎn)稱CCK-8）試劑可用于簡(jiǎn)便而準(zhǔn)確的細(xì)胞增殖和毒性分析。CCK-8&MTT方法比較方法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)CCK-8法靈敏度高、不使用有機(jī)溶劑、檢測(cè)迅速、重復(fù)性好價(jià)格較MTT貴、CCK8試劑的顏色為淡紅色、與含酚紅的培養(yǎng)基顏色接近，容易漏加或多加MTT法價(jià)格便宜操作步驟較多，需要使用有機(jī)試劑，靈敏度不如CCK-8，多數(shù)需要配制，檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，細(xì)胞毒性較高原理CCK-8是MTT的升級(jí)產(chǎn)品，其基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(

細(xì)胞周期檢測(cè)（流式細(xì)胞術(shù)）2022/10/18: 原理流式細(xì)胞周期檢測(cè)是一種常見(jiàn)的檢測(cè)細(xì)胞增殖情況的方法之一，細(xì)胞在不同周期時(shí)，其內(nèi)的DNA含量不同。碘化丙啶（PI）作為一種核酸嵌入型染料，能夠進(jìn)入固定后的細(xì)胞中，與細(xì)胞內(nèi)的核酸結(jié)合，其熒光強(qiáng)度與DNA含量成正比。通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同細(xì)胞中的熒光強(qiáng)度，從而判定不同組別中細(xì)胞周期發(fā)生的變化。用途檢測(cè)不同組別或處理對(duì)某種細(xì)胞周期的改變。材料與儀器【器材】流式細(xì)胞儀、移液器、槍頭、離心管、離心機(jī)、流式細(xì)胞儀、水浴鍋、流式管、濾頭；【試劑】0.25％胰蛋白酶溶液、PBS、RNA酶、PI染液、70％乙醇

原代細(xì)胞培養(yǎng)2022/10/18: 簡(jiǎn)介細(xì)胞培養(yǎng)是指將細(xì)胞從動(dòng)物或植物體內(nèi)取出，然后在適宜的人工環(huán)境中生長(zhǎng)的過(guò)程。細(xì)胞可以在培養(yǎng)前直接從組織中取出并通過(guò)酶或機(jī)械方法進(jìn)行解離，也可以來(lái)源于已建立的細(xì)胞系或細(xì)胞株。包括原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)。原代與細(xì)胞系培養(yǎng)比較類型優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)原代細(xì)胞培養(yǎng)非變異的、非永生化的細(xì)胞；具有更好的生理相關(guān)性，各方面更接近體內(nèi)狀態(tài)；具有一定的生命周期培養(yǎng)周期長(zhǎng)、不同批次細(xì)胞差異大、培養(yǎng)原代細(xì)胞花費(fèi)更高細(xì)胞系培養(yǎng)相對(duì)便宜，可以無(wú)限傳代；培養(yǎng)周期短，短時(shí)間可以獲得大量細(xì)胞發(fā)生異倍化，細(xì)胞生理活性等相關(guān)性能和正常細(xì)胞差異較

貼壁細(xì)胞傳代2022/10/18: 簡(jiǎn)介在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，必須有可以貼附的支持物表面，其依靠自身分泌或培養(yǎng)基中的貼附因子才能在該表面生長(zhǎng)增殖的離體動(dòng)物的培養(yǎng)細(xì)胞。由于血清具有終止胰蛋白酶消化，提供細(xì)胞生長(zhǎng)所需的貼壁因子、免疫球蛋白、胰島素等其它營(yíng)養(yǎng)成分及細(xì)胞因子，因此成為體外細(xì)胞培養(yǎng)液中的常用添加成分，其對(duì)細(xì)胞的培養(yǎng)意義重大。原理細(xì)胞在人工基質(zhì)上單層生長(zhǎng)（貼壁培養(yǎng)）貼壁細(xì)胞分類：皮細(xì)胞型，成纖維細(xì)胞型，游走細(xì)胞型和多型細(xì)胞型。在顯微鏡下觀察時(shí)，貼壁細(xì)胞在瓶底伸展并延伸成梭型或不規(guī)則的三角形或扇形或其它形態(tài)，而且晃動(dòng)培養(yǎng)液時(shí)，細(xì)

細(xì)胞凍存保種2022/10/18: 細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)中晚期，以培養(yǎng)基制備高濃度細(xì)胞懸液，加入細(xì)胞保護(hù)劑，等份轉(zhuǎn)移至凍存管中，緩慢冷凍。市場(chǎng)上有多家成熟的無(wú)血清凍存液，這些試劑簡(jiǎn)單實(shí)用，極其便捷。對(duì)一些難復(fù)蘇的細(xì)胞極其友好。但是對(duì)于長(zhǎng)期的細(xì)胞留庫(kù)保種還是建議采用傳統(tǒng)的方法。兩種凍存液比較方法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)傳統(tǒng)DMSO/甘油凍存法能較好的維持細(xì)胞的特性一些細(xì)胞凍存效果不佳無(wú)血清無(wú)蛋白凍存法使用方便，對(duì)新手友善同樣含有DMSO，某些敏感細(xì)胞慎用原理傳統(tǒng)上的細(xì)胞凍存（甘油/二甲基亞砜做保護(hù)劑）講求的是：慢凍速溶。細(xì)胞凍存時(shí)向培養(yǎng)基中加入的甘油或二

為什么細(xì)胞培養(yǎng)需要用到胎牛血清？2022/10/13: 胎牛血清的作用：胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量最大的天然培養(yǎng)基，含有豐富的細(xì)胞生長(zhǎng)必須的營(yíng)養(yǎng)成份，常用于動(dòng)物細(xì)胞的體外培養(yǎng)，具有極為重要的功能。1.提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒(méi)有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物，以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。2.提供結(jié)合蛋白，能識(shí)別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。3.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合，起到解毒作用。4.是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來(lái)源。5.起酸堿度緩沖液作用。6.提供蛋白酶抑制劑，使在細(xì)胞傳代時(shí)使剩余

Biozellen基質(zhì)膠在小鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)的使用步驟2022/08/10: 小鼠皮下成瘤、小鼠皮下血管生成實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備程序A、細(xì)胞房?jī)?nèi)材料準(zhǔn)備、試劑制備及步驟(1)材料準(zhǔn)備:1.冰盒、2.37℃水浴槽、3.C緩沖溶液(10X)、4.含15-20%血清細(xì)胞培養(yǎng)液(例如:含15-20%血清的DMEM，DMEM-F12等，不可用PBS)、5.A膠(2X)、6.細(xì)胞培養(yǎng)液、7.23-26G針頭、8.1mL針筒、9.細(xì)胞。(2)試劑制備:1、C緩沖溶液(0.5X)制備:使用37℃水浴回溫含15-20%血清的細(xì)胞培養(yǎng)液(例如:含15-20%血清的DMEM或DMEM-F12等，不可用PB

我的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)效率低，怎么辦？2022/07/29: 脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)指的是，脂質(zhì)包裹待轉(zhuǎn)染DNA形成復(fù)合體，與細(xì)胞膜融合或內(nèi)吞，進(jìn)入細(xì)胞。然而，大量的脂質(zhì)體-DNA復(fù)合體，只有一小部分能運(yùn)送到細(xì)胞質(zhì)并進(jìn)入細(xì)胞核中。如何提高脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染效率的關(guān)鍵，就在這一步：提高復(fù)合體進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)的效率。1、避免使用陰離子試劑，使用新一代聚陽(yáng)離子試劑，適用范圍廣，毒性相較以前的脂質(zhì)試劑小。2、使用陽(yáng)離子脂質(zhì)與DNA的*佳比例，以及一定數(shù)量細(xì)胞的陽(yáng)離子脂質(zhì)用量。可向購(gòu)買試劑的公司進(jìn)行詢問(wèn)。這是因?yàn)檫^(guò)量的脂質(zhì)容易受到培養(yǎng)皿中其他帶電荷物質(zhì)的干擾，如細(xì)胞外基質(zhì)中的硫酸

怎么提高電穿孔法轉(zhuǎn)染的效率？2022/07/29: 電穿孔法難點(diǎn)在于提高電穿孔的效率。實(shí)驗(yàn)操作者一般能從電轉(zhuǎn)儀廠家得到轉(zhuǎn)染的詳細(xì)方案和優(yōu)化指導(dǎo)。當(dāng)你需要自己優(yōu)化轉(zhuǎn)染效率時(shí)，可以從以下方面進(jìn)行：1、外加電場(chǎng)的強(qiáng)度：電壓過(guò)低，細(xì)胞膜不能形成小孔，使得外源分子通過(guò)；電壓過(guò)高，細(xì)胞會(huì)受到不可逆損傷，以至于裂解。對(duì)于大部分哺乳細(xì)胞來(lái)說(shuō)，電壓250～500V/cm是合適的。實(shí)驗(yàn)操作者需要查詢資料，找到所需細(xì)胞系轉(zhuǎn)染的合適電場(chǎng)強(qiáng)度。這部分的操作建議通過(guò)逐級(jí)增加電壓來(lái)確定*佳轉(zhuǎn)染電場(chǎng)強(qiáng)度。2、電脈沖時(shí)間的長(zhǎng)短：一般電脈沖只進(jìn)行1次。根據(jù)電轉(zhuǎn)儀的具體參數(shù)設(shè)置，不同

RAW264.7細(xì)胞轉(zhuǎn)染質(zhì)粒DNA、siRNA在發(fā)表文章中的經(jīng)驗(yàn)分享2022/06/17: 石河子大學(xué)動(dòng)物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，在2021年發(fā)表文章到FrontiersinImmunology的學(xué)術(shù)期刊中科研者使用美國(guó)zetalife轉(zhuǎn)染試劑，高效率轉(zhuǎn)染質(zhì)粒DNA和siRNA到RAW264.7細(xì)胞，具體轉(zhuǎn)染RAW264.7細(xì)胞方法經(jīng)驗(yàn)如下：（注意：本文轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中使用的細(xì)胞數(shù)量、試劑用量和操作方法不適用于傳統(tǒng)lipo3000轉(zhuǎn)染試劑或類似產(chǎn)品）AllplasmidsａndsiRNAs(20uM/uL)weretransfectedusingtheAdvancedDNARNATransfecti

夏天到了，您做好預(yù)防細(xì)胞污染了嗎？2022/06/17: 注意事項(xiàng)：夏天到了，天氣炎熱，空氣中的溫度濕度都在上升，這時(shí)最易滋生細(xì)菌等微生物，導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程會(huì)沒(méi)有那么的順利，總是被污染，而且微生物繁殖的速度非常快。今天我們就來(lái)說(shuō)道說(shuō)道細(xì)胞污染應(yīng)該怎么預(yù)防、處理。目前細(xì)胞污染大致可分為：細(xì)菌、真菌、支原體、黑膠蟲(chóng)、病毒等污染。那么想要解決問(wèn)題，我們就需要知道細(xì)胞是遭受了何種污染，才可對(duì)癥下藥。接下來(lái)我們將帶領(lǐng)大家逐步分析這些污染。細(xì)菌細(xì)菌污染時(shí)，培養(yǎng)基在短時(shí)間內(nèi)變成黃色或白色渾濁，有時(shí)稍加震蕩，便會(huì)有很多混濁物漂起。有些狀況下培養(yǎng)基顏色改變不明顯但細(xì)胞形

細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)全步驟解析2022/06/08: 實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備：細(xì)胞，可拍照的顯微鏡,Transwell小室,孔徑8μm,沒(méi)包被膠的Transwell,遷移實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞培養(yǎng)板24孔板。細(xì)胞培養(yǎng)板應(yīng)當(dāng)與購(gòu)買的Transwell小室相配套,BD公司的Matrigel,無(wú)血清的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，BSA，正常的*培養(yǎng)基,無(wú)菌PBS,棉簽,胰酶,4%多聚甲醛固定液或者甲醇,結(jié)晶紫染液(0.1%PBS結(jié)晶紫)Transwell操作步驟01用BD公司的Matrigel1:8或者根據(jù)細(xì)胞產(chǎn)生mmp的量來(lái)決定稀釋,包被Transwell小室底部膜的上室面,置37℃30m

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