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細胞轉染實驗失敗了,怎么解救?2022/12/14
細胞轉染實驗失敗了,怎么解救?細胞轉染在細胞生物學和分子生物學中占據重要地位,廣泛用于基因與蛋白功能研究,成為實驗室工作中的常規技術手段之一。常見的異常結果是細胞大量死亡、轉染效率不高、重復實驗不穩定。如何找到癥結所在,讓實驗順利進行,就顯得比較重要。01細胞大量死亡02轉染效率不高03重復實驗不穩定可以把細胞轉染從開始設計到最終的檢測,大致可以由6個步驟組成:核酸準備、試劑選擇、細胞鋪板、轉染操作、細胞培養、效果檢測。每一步都會影響最終的結果。當出現異常結果時,就需要具體分析原因,才能避免進一
mRNA轉染技術——解決DNA難轉問題2022/12/13
20世紀60年代諾貝爾獎得主FrancoisJacob發現mRNA,并闡明了其作為不穩定中間體的作用,將信息從基因傳遞到核糖體以進行蛋白質合成。六十年來,mRNA技術的發展十分迅速,近年mRNA疫苗的橫空出世更具有劃時代的意義。“醫學的未來是mRNA,基本上你可以使用mRNA治愈一切”。隨著研發與技術的發展,mRNA技術會發揮越來越巨大的作用。mRNA的轉染歷史,可以追溯到20世紀的80年代,運用不同的化學試劑進行mRNA的細胞轉染。外源基因的細胞轉染,mRNA比DNA具有更快速、安全的優勢,體
探討 rRNA去除的方法與必要性2022/11/12
遺傳中心法則表明,DNA是生物體內遺傳信息的載體。遺傳信息在精密的調控下從DNA轉錄成RNA,再傳遞到蛋白質。因此RNA被認為是DNA與蛋白質之間生物信息傳遞的“橋梁”,在研究轉錄組信息中占有著重大的作用。背景介紹轉錄組(transcriptome)是指在某一特定的生理條件下,細胞、組織或者生物體內所有的轉錄產物的集合,即轉錄出來的所有RNA總和,包括編碼RNA(即mRNA)和ncRNA(tRNA、rRNA、miRNA、lncRNA、circRNA)等不同類型的RNA分子。在這之中核糖體RNA(
國產GMP級轉染試劑助力細胞基因治療的持續快速發展2022/11/11
國產GMP級轉染試劑助力細胞基因治療的持續快速發展細胞基因治療(CellandGeneTherapy,CGT)作為生命科學研究的應用技術領域,分為細胞治療和基因治療兩大部分。與常規的藥物與治療方案相比,基因治療能從源頭上解決疾病的發生,通過改變細胞內的遺傳信息,進而改變基因表達及相應細胞性狀,終達到治愈疾病的目的,故而在一些目前無法治療或療效不佳的疾病上有明顯優勢。基因治療近年在腫瘤、感染性疾病、神經系統疾病等多種疾病領域顯示出巨大的應用潛力,正迅速發展。來源:頭豹研究院從2016年到2020年
蛋白酶體抑制劑--MG132蛋白酶抑制劑2022/11/08
蛋白酶體抑制劑--MG132蛋白酶體(Proteasomes)是蛋白質合成過程中錯誤折疊的蛋白和其他蛋白被proteolyzed的主要降解途徑。它存在于所有的真核細胞、古細菌和一些細菌中,是一種具有多重催化活性的蛋白酶,由多個催化和調節蛋白組成。它具有三種或四種不同的肽酶活性,包括胰蛋白酶樣、糜蛋白酶樣和肽基谷氨酰肽水解活性。大多數蛋白質在被蛋白酶體降解之前被泛素化,通過泛素-蛋白酶體機制降解的蛋白質首先與泛素結合,泛素是一種76個氨基酸的高度保守殘基。泛素化的蛋白被26S蛋白酶體識別,它水解和
如何定量低豐度目的基因的表達(含詳細解決方法)2022/10/09
有時候,qPCR實驗會成為阻礙你課題順利開展的強勢攔路虎!看似簡單的基因表達量差異驗證,當遇到低豐富表達的基因時,也許就舉步維艱。模板獲取困難導致的RNA提取量少或RNA質量不佳,即使選用蕞佳的試劑、篩選出良好的引物,也有可能qPCR定量得到的內參基因CT值在18-20個cycle,而目的基因在31-35個循環。遇到這種情況,你是怎么解決的呢?qPCR在低豐度表達基因定量中的局限性基因的豐度是指基因在基因組中的拷貝數。可分為高豐度,中等豐度和低豐度。低豐度是指目的基因在基因組中的拷貝數低,可簡單
DSS潰瘍性結腸炎模型的構建2022/09/26
DextranSulfateSodiumSalt(DSS)潰瘍性結腸炎模型的建立DSS造模發展歷程目前有多種動物模型被廣泛用于研究炎癥性腸炎(inflammatoryboweldisease,IBD)的病因、發病機制及測試新開發藥物藥效等,尤其以葡聚糖硫酸鈉鹽(DextranSulfateSodiumSalt,DSSMW:36000~50000)結腸炎(ulcerativecolitis,UC)模型應用廣。圖1.DSS潰瘍病結腸炎模型發展歷程DSS建構的UC模型特點通過給予動物自由飲用不同濃度的
逆全球化背景下,基質膠缺貨是否會成為常態2022/09/22
逆全球化背景下,基質膠缺貨是否會成為常態隨著疫情的持續影響,多國都開啟了保護主義模式,全球化進程戛然而止,作為21世紀具前景的生命科學也受到了相關沖擊。在今年4~6月份,基質膠在全國大面積缺貨,導致很多企業無法按時完成產品和服務交付、科研工作者科研成果不能及時發表以及即將畢業的莘莘學子們的畢業論文無法按時完成實驗導致畢業進程受到很大的影響。在中美脫鉤的影響下,如果出現關鍵性生物原料出現如芯片一樣的卡脖子問題,將會對中國的生命科學產業和研究造成嚴重沖擊,這是我們不想看到的,因此加速國產替代是個必然
基質膠——3D類器官培養成功的關鍵2022/09/22
基質膠——3D類器官培養成功的關鍵隨著疫情的持續影響,多國都開啟了保護主義模式,全球化進程戛然而止,作為21世紀前景的生命科學也受到了相關沖擊。在今年4~6月份,基質膠在全國大面積缺貨,導致很多企業無法按時完成產品和服務交付、科研工作者科研成果不能及時發表以及即將畢業的莘莘學子們的畢業論文無法按時完成實驗導致畢業進程受到很大的影響。在中美脫鉤的影響下,如果出現關鍵性生物原料出現如芯片一樣的卡脖子問題,將會對中國的生命科學產業和研究造成嚴重沖擊,這是我們不想看到的,因此加速國產替代是個必然趨勢和過
經典信號通路——JAK-STAT信號通路2022/09/22
經典信號通路——JAK-STAT信號通路通路簡介JAK-STAT通路是一條由細胞因子刺激的信號轉導通路,參與細胞的生長、分化、凋亡以及免疫調節等許多重要的生物學過程。此通路主要由三個類別組成:酪氨酸激酶相關受體、酪氨酸激酶JAK和產生效應的轉錄因子STAT。基本性質酪氨酸激酶受體本身不具有激酶活性,但是細胞內有酪氨酸激酶JAK的結合位點,受體與配體結合后,活化與之結合的JAK,磷酸化靶蛋白的酪氨酸殘基,將信號從細胞外傳遞到細胞內。因此,JAK是一類非跨膜型的酪氨酸激酶,既能磷酸化細胞因子受體又能
高活性CAR-T靶點蛋白助力細胞治療研發2022/08/16
高活性CAR-T靶點蛋白助力細胞治療研發嵌合抗原受體T(CAR-T)細胞療法是一種基于體外改造T細胞,使其表面表達特異性識別腫瘤表面抗原的受體的腫瘤免疫療法,改造后的T細胞輸入患者體內,不需要抗原遞呈細胞的幫助,直接靶向體內癌細胞并發揮免疫殺傷作用。如CD19,一種細胞表面蛋白,在惡性B細胞上均勻而強烈地表達。圖1.CAR結構圖(圖片來源于華安證券研究所:CAR-T行業深度報告)全球CAR-T產品現狀目前全球已有8款上市的CAR-T療法,其中2款是國內的,分別是藥明巨諾的瑞基奧侖賽注射液與復星凱
小眾抗氧化劑的“扛把子”--抗氧化劑NAC2022/08/16
小眾抗氧化劑的“扛把子”--抗氧化劑NAC自1960年代以來,NAC作為一種藥物使用,并被列入世界衛生組織基本藥物標準清單。NAC是一種強大的抗氧化劑,也是一種解毒劑。除了做為化痰劑與臨床治療對乙酰氨基酚(acetaminophen)中毒外,它還在臨床上被應用于治療多種疾病,如慢性支氣管炎、多囊卵巢綜合征、心臟病等。圖1NAC分子結構式(CAS.NO616-91-1)那NAC究竟是什么了?NAC即N-acetyl-L-cysteine,也稱LNAC,中文名為N-乙酰半胱氨酸,是半胱氨酸的乙酰化衍
干細胞領域:Nature重磅發文,實現化學小分子誘導多潛能干細胞2022/08/16
干細胞領域:Nature重磅發文,實現化學小分子誘導多潛能干細胞1.研究背景多潛能干細胞具有無限增殖的特性和分化成生物體所有功能細胞類型的能力,使其在細胞治療、藥物篩選和疾病模型等領域具有廣泛的應用價值,尤其在再生醫學領域中發揮著關鍵的作用。如何使高度分化的成體細胞重獲類似胚胎發育早期的多潛能狀態,一直是干細胞與再生醫學領域研究的重點內容之一。2.Nature重磅發文2022年4月13日,北京大學鄧宏魁教授及其團隊在頂級期刊Nature上發表題為“Chemicalreprogrammingofh
干細胞培養常用小分子大全2022/08/01
干細胞培養常用小分子大全一.干細胞的背景干細胞(StemCell)是一種未高度分化的細胞,具有自我更新和分化為特定細胞、各種再生組織和器官的能力,醫學界稱為"萬用細胞"。在一定條件下,干細胞可以分化成多種功能細胞,在體外疾病模型、組織工程學、再生醫學、細胞治療、藥物發現和開發等方面有巨大的應用前景,也有助于我們研究和闡明生物體基本的生化和發育過程。干細胞的治療潛能越來越受到重視,如何誘導干細胞定向分化是當前研究的熱點。研究發現,小分子化合物在干細胞調控中發揮著越來越重要的作用:1.*或部分取代原
類器官培養指南大全2022/08/01
類器官培養指南大全——一文帶您深度了解類器官類器官簡介類器官(Organoid)是在體外,經過3D培養,能夠在體外模擬正常(或疾病)狀態下體內器官(或組織)的三維結構和生理功能。通俗點講,類器官是三維細胞培養物,將干細胞培養于基質膠中,在化學小分子抑制劑/激活劑、細胞因子、培養基添加劑等物質作用下經過培養得到的相應器官類似的組織結構。類器官的特點類器官擁有自我更新能力,能維持來源組織的生理結構和功能,享有“培養皿中的微器官”之稱。利用干細胞的自我更新、分化能力以及自我組織能力,類器官可冷凍保存用
基質膠實驗應用——3D培養2022/08/01
傳統細胞培養是在單層中生長,細胞是扁平并可以在水平面上自由粘附和擴散,但不支持在垂直方向上擴散,2D表面上培養的細胞具有強烈的頂端-基底極性,這種極性與某些細胞類型相關,例如上皮細胞;3D細胞培養即三維細胞培養,是指將具有三維結構的不同材料載體與各種細胞在體外共培養,使細胞在載體的三維立體空間結構中遷移、生長,形成三維的細胞-載體復合體,主要用于細胞球、類器官等培養。圖1.在ECM涂層玻璃或塑料表面(2D)與典型的3DECM之間區別[1]作為疾病驗證模型,相比于傳統2D疾病模型,以3D為基礎培養
基質膠實驗應用——血管生成2022/08/01
血管生成(angiogenesis)會與傷口愈合、炎癥、類風濕性關節炎、糖尿病視網膜病變、黃斑變性和腫瘤生長等存在著密切的關聯。在生物體生長過程中,血管生成是新組織生長的重要組成部分。在成年期,除在特殊器官中受到嚴格調節的周期性事件外,由于促血管生成和抗血管生成內源性因素之間的平衡,幾乎每個正常組織都缺乏大量的生理性血管生成。當促血管生成方向的平衡被打亂時,微血管內皮細胞(EC)會轉變為血管生成表型,從而開始血管生成反應,該反應可以被消除或加速。在研究過程中所涉及到血管生成實驗,傳統的體內血管生
凍干原料怎么選?翌圣生物更多、更穩、更優2022/08/01
凍干原料怎么選?翌圣生物更多、更穩、更優凍干原料怎么選—翌圣生物更多、更穩、更優疫情仍然在全球范圍內起伏跌宕,為了進一步提高我國感染“早發現”和“快速發現”的能力,并為未來疫情防控提供技術儲備,科技部面向社會征集靈敏度高、檢測時間短、成本低、通量靈活、產業轉化成功率高的快速檢測產品。為了達到即時檢測快速出報告的目的,需要盡可能地簡化檢測的每個流程,其中就包括簡化運輸過程采用凍干試劑。凍干試劑無需冷鏈運輸,極大地提高了便利性并大幅度降低了運輸的成本,與此同時也對凍干原料提出了更高的要求。凍干原料—
干燥試劑如何選擇:風干與凍干的區別2022/07/21
干燥試劑如何選擇:風干與凍干的區別干燥試劑的優勢隨著人們對健康問題越來越重視,體外診斷(IVD)領域呈快速發展的趨勢,尤其是的出現,更加促進了IVD市場的飛速發展。目前RT-qPCR已被廣泛用于IVD診斷試劑產品開發,但是RT-qPCR液體診斷試劑運輸成本高,性能不穩定,保質期短。干燥試劑無需冷鏈運輸,可常溫運輸,避免了試劑反復凍融影響試劑的性能和保質期,大幅度降低了運輸的成本。不僅方便用戶使用,也降低了對操作人員的要求。圖1.干燥形式的優勢常溫運輸及保存是促使干燥試劑引發分子診斷行業重點關注的
翌圣工業級高純度脫氧核糖核苷酸(dNTP)2022/07/20
翌圣工業級高純度脫氧核糖核苷酸(dNTP)隨著技術的不斷發展,DNA合成應用的復雜程度也不斷提升,即使體系中只有一種質量較差的試劑,也會對最終成品性能產生負面影響。翌圣dNTP系列產品在嚴格的純度和功能標準下經過質量評估和驗證,dNTP純度≥99%,不含DNase、RNase、磷酸酶和切割活性,同時無細菌和人源基因組殘留干擾,產品批次間穩定,適用于各類高靈敏度和高重復性的DNA合成應用。翌圣dNTP系列產品秉承方便、靈活、高效的理念而設計,擁有預混合(Mix)、單管套組(Set)與單管三種產品形
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